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文檔簡介
1、目的:研究博萊霉素是否可誘導胸膜間皮細胞發(fā)生上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換(EMT),探討胸膜間皮細胞發(fā)生EMT在特發(fā)性肺纖維化發(fā)生中的作用。
方法:體外培養(yǎng)胸膜間皮細胞,以博萊霉素處理,觀察胸膜間皮細胞Ⅰ型膠原表達的變化;Westernblot測定胸膜間皮細胞發(fā)生上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換時相關(guān)表型蛋白的變化;倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化;細胞劃痕實驗檢測胸膜間皮細胞的遷移。最后用博萊霉素多次腹腔注射的方法復制C57小鼠肺纖維化模型,Mass
2、on三聯(lián)染色檢測肺組織膠原含量、免疫熒光檢測胸膜間皮細胞標志物calretinin蛋白表達,從而在體判斷胸膜間皮細胞的肺內(nèi)移行情況。
結(jié)果:博萊霉素處理胸膜間皮細胞后,Ⅰ型膠原蛋白表達升高,上皮細胞表型蛋白CK-8蛋白表達下降,間充質(zhì)細胞標志蛋白波形蛋白、α-SMA蛋白表達升高,而與細胞完整性相關(guān)的E-鈣粘蛋白表達不變。細胞形態(tài)在24h發(fā)生改變,48h、72h更為明顯,由鵝卵石形逐漸拉長向梭形改變。細胞劃痕實驗提示博萊霉素誘導
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