甘肅省結核分枝桿菌臨床分離株基因分型初步研究.pdf

1、目的:評價間隔寡核苷酸分型(Spoligotyping)及多位點可變數(shù)量串聯(lián)重復序列分析(MLVA)兩種分型方法在甘肅省結核病分子流行病學中的應用，初步探索甘肅省結核分枝桿菌的基因型及其分布，為防治結核病提供科學依據(jù)。 方法:利用MLVA和Spoligotyping基因分型方法，對確診的結核病患者分離的結核分枝桿菌進行基因分型研究。MLVA方法選擇了15個VNTR位點，設計引物，采用PCR擴增、瓊脂糖凝膠電泳檢測，并利用BioN

2、umerics4.5軟件進行DNA指紋圖譜多態(tài)性分析。Spoligotyping方法通過雜交技術對雜交結果進行聚類分析。最后用Spss11.0統(tǒng)計軟件對相關資料進行統(tǒng)計分析。結果采用Spoligotyping分型方法，215株結核分枝桿菌可分為3個基因群22種基因型，該地區(qū)主要流行株為北京家族基因型。也發(fā)現(xiàn)了在國內(nèi)較少報道的H、T、MANU家族基因型菌株。北京家族菌株構成比在不同年齡組、性別、地區(qū)、發(fā)病情況、治療情況和治療史比較，除了蘭

3、州市病人菌株北京家族構成比明顯大于非蘭州市病人菌株外(p<0.05)，其他不同分組顯示北京家族構成比差別沒有統(tǒng)計學意義。發(fā)現(xiàn)北京家族與非北京家族基因型菌株的耐藥率之間差異無統(tǒng)計學意義。采用MLVA分型方法，根據(jù)被檢菌株15個VNTR位點的重復次數(shù)，對215株結核分枝桿菌臨床分離株進行聚類分析，215株結核分枝桿菌呈現(xiàn)7個基因群127種基因型，其中e群74.88％(161/215)為主要流行型(Spoligotyping鑒定為北京家族基因

4、型)。不同人群結核分枝桿菌成簇率的差別，除了有抗結核治療史患者菌株成簇率高于無抗結核治療史患者外，性別、年齡、是否規(guī)則治療、耐藥性之間的成簇率差異都無統(tǒng)計學意義。對甘肅地區(qū)結核分枝桿菌進行MLVA分型的位點中，MIRU21、MIRU26位點等位基因多態(tài)性最好，ETR-A、ETR-E、MIRU16、MIRU40位點呈中等多態(tài)性。兩種新型的基因分型技術相比較，Spoligotyping分型方法把215株結核分枝桿菌分為22種基因型，而MLV

5、A分型方法把215株結核分枝桿菌臨床分離株分為127種基因型。對同一基因型的結核分枝桿菌分型的符合率為94.41％。結論初步結果證實甘肅省結核病患者結核分枝桿菌分離株基因型具有多態(tài)性。北京基因型結核分枝桿菌為該地區(qū)主要流行株、也發(fā)現(xiàn)了中國較為少見的基因型菌株H、T、MANU等基因型。目前的結果尚不能證明北京家族基因型結核分枝桿菌與耐藥性之間存在相關性。MIRU21.、MIRU26、ETR-A、ETR-E、MIRU16、MIRU40等位點

6、是分析甘肅省結核分枝桿菌基因型的首選位點。Spoligotyping在對結核分枝桿菌進行株水平鑒定時，其辨別能力略低于MAVA，它可以用于有效的鑒定北京家族菌株，有較為完善的國際數(shù)據(jù)庫，可以進行地區(qū)間的對比分析。MLVA省時、省力、準確、易于比較或共享的基因分型對含有IS6110拷貝數(shù)小于6的菌株有較好的鑒別能力。兩種新型的基因分型技術相比較，MLVA分型方法比Spoligotyping分型方法的分辨力較好，但是兩種方法相互補充可大大提