卵泡刺激素與絕經(jīng)后乳腺癌發(fā)病機理的初步研究.pdf

1、研究背景：
　　乳腺癌仍然是女性患病率最高的腫瘤，占女性腫瘤死亡病因的第二位。絕經(jīng)后乳腺癌的發(fā)病率在我國仍然處于各年齡段的高峰期。女性絕經(jīng)后，體內(nèi)激素水平發(fā)生了重大的變化，隨著卵巢的衰竭，雌激素(Estradiol，E2)分泌水平的下降，下丘腦以及垂體失去了E2的負反饋，將分泌更多的卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)以及黃體生成素(luteinizing Hormone，LH)。女性生命

2、的1/3將在高促性腺激素水平中度過。
　　抗雌激素以及其受體治療是目前乳腺癌內(nèi)分泌治療的主要手段，但是仍然有許多乳腺癌患者不能從內(nèi)分泌治療中獲益。除雌激素外，研究發(fā)現(xiàn)許多的內(nèi)分泌激素與乳腺癌的發(fā)病以及進展相關(guān)，包括泌乳素(Prolactin，PRL)，人絨毛膜促性腺激素（Human Chorionic Gonadotropin，hCG），LH等。這些激素協(xié)同或者直接影響乳腺癌的發(fā)生以及進展。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)SH參與了女性絕經(jīng)后

3、疾病的發(fā)生，但是FSH在乳腺癌發(fā)病中的研究尚沒有詳細的研究。有研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者血清FSH水平與腫瘤的無復發(fā)生存率以及總生存率負相關(guān)。并且也有研究發(fā)現(xiàn)血清FSH水平與乳腺癌組織的Her-2表達相關(guān)。
　　FSH通過其特異性受體（Follicle-stimulating hormone receptor, FSHR）介導細胞增殖，分化。FSHR一直被認為只在特異性組織中表達，即女性顆粒細胞以及男性睪丸支持細胞。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)S

4、HR可以在眾多的腫瘤細胞中表達包括卵巢癌，前列腺癌，子宮內(nèi)膜癌，骨骼中表達。FSHR參與了這些腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移。FSHR在骨骼細胞中表達被認為是絕經(jīng)后女性骨質(zhì)疏松的主要原因，而非是經(jīng)典的雌激素途徑。在最近的研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)SHR在許多實體腫瘤的血管內(nèi)皮細胞中表達，這些表達在腫瘤與正常組織交界處。乳腺癌體外細胞系以及乳腺癌組織是否表達FSHR，以及FSH能否通過FSHR促進乳腺癌的發(fā)病仍然不明確。
　　實驗目的:
　　選取絕經(jīng)后

5、病人對研究對象，研究血清FSH以及LH在女性乳腺癌病人和非腫瘤普通婦科炎癥疾病對照人群中的差異性;研究血清FSH以及LH水平與絕經(jīng)后乳腺癌細胞ER，PR，Her-2以及Ki67表達的相關(guān)性;研究FSH以及LH與乳腺癌臨床分期，分級以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系;研究FSHR是否在乳腺癌體外細胞系以及癌組織中表達。體外實驗研究FSH是否促進乳腺癌細胞的增殖與轉(zhuǎn)移，及其具體的分子機制;體內(nèi)實驗研究FSH是否會促進乳腺癌細胞的增殖。
　　實驗方法

6、:
　　第一部分:通過收取187名絕經(jīng)后乳腺癌患者的病例資料以及內(nèi)分泌數(shù)據(jù)，收集了同時期374名非腫瘤普通婦科炎癥疾病的絕經(jīng)后患者的內(nèi)分泌檢查數(shù)據(jù)。非腫瘤人群的構(gòu)成主要為婦科的炎癥性疾病，如陰道炎，宮頸炎等。建立數(shù)據(jù)庫，統(tǒng)計分析FSH以及LH在絕經(jīng)后乳腺癌患者與絕經(jīng)后健康人群中的差異。分析FSH以及LH與乳腺癌的ER, PR，Her-2 Ki67的表達，以及臨床分期，分級，以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。
　　第二部分:體外實驗研究

7、FSH是否促進乳腺癌細胞的增殖與轉(zhuǎn)移。使用MTT檢測FSH對乳腺癌細胞系Bcap-37，MDA-MB-231的促增殖作用。使用WesternBlot檢測FSH刺激以上兩株細胞引起的EGFR，ERK1/2，AKT等關(guān)鍵信號通路分子的激活改變。使用EGFR，ERK1/2等信號通路的抑制劑后，研究FSH促進增殖的主要作用信號通路。通過劃痕試驗研究FSH對Bcap-37，MDA-MB-231細胞系的遷移能力影響，使用基質(zhì)膠Transwell實驗

8、研究FSH對以上兩株細胞的侵襲能力影響，并通過Western Blot檢測相應的分子機制。
　　第三部分:體內(nèi)實驗研究FSH是否促進乳腺癌細胞系Bcap-37，MDA-MB-231移植瘤的增殖。通過對Balb/c裸鼠去勢手術(shù)建立絕經(jīng)后的動物模型。接種乳腺癌細胞系Bcap-37，MDA-MB-231到Balb/c裸鼠皮下。實驗分為4組:假手術(shù)組，去勢對照組，去勢后使用GnRha組，去勢后使用GnRHa然后使用FSH組。假手術(shù)組和去勢

9、對照組用于比較去勢對腫瘤增殖的影響，GnRHa組使用GnRHa抑制裸鼠體內(nèi)的FSH以及LH分泌，排除垂體分泌激素的影響。GnRHa加用FSH組，在GnRHa之后使用FSH使裸鼠體內(nèi)的FSH達到100IU/L左右的絕經(jīng)后水平。
　　第四部分:檢測FSHR在乳腺癌體外細胞系以及乳腺癌組織中的表達。使用RT-PCR，以及Reverse-PCR檢測Bcap-37，MDA-MB-231等乳腺癌細胞系的FSHR表達情況。同時檢測FSHR在17

10、例乳腺癌臨床樣本中的表達情況。
　　實驗結(jié)果:
　　第一部分:
　　a)絕經(jīng)后乳腺癌患者血清FSH，LH比對照人群高（61.83±1.475 vs.48.13±1.256 IU/L;27.83±0.74 vs.23.88±0.6499 IU/L）。
　　b)絕經(jīng)后乳腺癌患者血清FSH水平與腫瘤Ki67，Her-2表達正相關(guān);LH水平與Ki67表達正相關(guān)。
　　c)血清FSH，LH濃度與絕經(jīng)后乳腺癌的腫瘤ER

11、，PR，腫瘤的的臨床分型，分級以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況沒有相關(guān)性。
　　第二部分:
　　a) FSH可以促進入乳腺癌細胞系Bcap-37，MDA-MB-231的體外增殖，可以促進Bcap-37細胞的遷移。
　　b) FSH通過EGFR/ERK1/2通路促進Bcap-37，MDA-MB-231細胞的增殖。
　　第三部分:
　　a)成功構(gòu)建了絕經(jīng)后的Balb/cnu/nu小鼠動物模型。
　　b) FSH(≈10

12、0IU/L)可以促進乳腺癌細胞系Bcap-37，MDA-MB-231移植瘤的體內(nèi)增殖。
　　第四部分:
　　Bcap-37，MDA-MB-231，MCF-7，T-47D，SK-BR-3，BT-474乳腺癌永生化細胞系以及17例乳腺癌病人癌組織無FSHR表達。
　　實驗結(jié)論:
　　a)絕經(jīng)后乳腺癌患者血清FSH和LH濃度較絕經(jīng)后對照人群高;FSH水平與乳腺癌組織的Ki67，Her-2表達正相關(guān);與乳腺癌的臨床分型，

13、分期，以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不相關(guān)。
　　b) FSH在體外通過EGFR/ERK1/2促進乳腺癌細胞系Bcap-37的增殖與轉(zhuǎn)移，以及MDA-MB-231細胞的增殖。
　　c)FSH(≈100IU/L)可以促進乳腺癌細胞Bcap-37，MDA-MB-231裸鼠移植瘤的體內(nèi)增殖。
　　d)乳腺癌細胞系(Bcap-37，MDA-MB-231，Mcf-7，T-47D，SKBR-3，BT-474)以及乳腺癌組織樣本中不表達FSHR。<