丹參脂溶性成分的色質(zhì)聯(lián)用分析及其作用機理研究.pdf

1、丹參，又稱血參、紫丹參、紅丹參等，為唇形科鼠尾草屬植物丹參(Salviamiltiorrhiza Bunge)的干燥根及根莖。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，歷代本草均有收載。丹參歸心、肝經(jīng)，藥性微寒，味苦、無毒，具有祛瘀止痛、活血調(diào)經(jīng)、養(yǎng)心除煩的功效。丹參在臨床上廣泛用于治療心血管系統(tǒng)疾病，具有擴張冠狀動脈、增加冠脈血流量、防止心肌缺血和心肌梗塞、改善微循環(huán)、降低心肌耗氧量等作用。其有效成分有水溶性和脂溶性兩大類，水溶性部分主要為酚

2、酸類化合物(包括丹參素、原兒茶醛、丹酚酸等)；脂溶性部分主要為二萜醌類化合物(包括丹參酮ⅡA、隱丹參酮等)。 長期以來人們對丹參的研究多集中在其臨床藥效以及配伍應用上，對于分析化學工作者而言，感興趣的則是丹參的藥效成分，各成分的性質(zhì)以及功效，分析化學家發(fā)展了多種分析技術對丹參藥效成分進行提取、分離、純化、表征等工作；對多種丹參類藥物中所含成分進行了測定；發(fā)展了多種指紋圖譜技術用于丹參藥材生長及丹參類藥物生產(chǎn)質(zhì)量的評估和控制；并進

3、行了丹參主要成分的活性及代謝研究。這些理論積累均為丹參的應用與發(fā)展奠定了基礎。隨著現(xiàn)代分析技術的發(fā)展，中藥現(xiàn)代化研究也進入了一個新的領域，由過去的“粗獷性”轉變?yōu)椤凹氈滦浴保蛇^去的“整體”轉變?yōu)椤熬唧w”，即以具體成分作為研究對象，在分子水平上研究其在生命過程中的作用機理，而不是僅從經(jīng)驗上對中藥藥理藥效進行大體上的解釋與推理?；诖耍狙芯空撐陌l(fā)展了色譜—質(zhì)譜聯(lián)用分析方法，從分子水平上進行丹參脂溶性成分的代謝規(guī)律研究，并探討了丹參脂溶性

4、成分與西藥及功能蛋白分子相互作用的機理，主要研究內(nèi)容與結果如下： 1．建立了用于丹參復雜體系中多種丹參酮類化合物的同時分離表征的高效液相色譜(HPLC)與電噴霧飛行時間質(zhì)譜(ESI/TOFMS)聯(lián)用技術；探討了含有二萜醌結構的丹參酮類化合物在電噴霧質(zhì)譜中的裂解規(guī)律。研究結果表明：該方法不僅可用于丹參酮類化合物的表征，而且非常適合于其他中藥復雜體系中多種成分的分離分析，尤其由于TOFMS具有高分辨分子量測定的能力，可基于精確測得的

5、化合物分子量，直接對其結構式進行推斷，同時還可有效地辨別元素組成不同卻具有相似分子量的化合物，在缺乏標準物質(zhì)的情況下，可準確、有效地對中藥成分進行表征。同時發(fā)揮HPLC的分離能力，一次測定就可對19種丹參酮類化合物進行分離表征，獲得19種丹參酮的質(zhì)譜裂解過程信息，結合相關資料，對這些化合物的結構進行鑒定。本工作所建立的聯(lián)用技術在中藥及天然產(chǎn)物多成分同時分析測定及表征中顯示出其獨特的優(yōu)越性，為天然藥物的研究提供了重要手段。 2．建

6、立了用于丹參酮代謝研究的高效液相色譜(HPLC)與電噴霧離子阱質(zhì)譜(ESI/ITMS)聯(lián)用技術；采用質(zhì)譜的全掃描分析功能對代謝物進行分析測定；總結了丹參酮代謝物的二級質(zhì)譜裂解特點，說明丹參酮在一相代謝中主要生成羥基化和去氫化代謝產(chǎn)物，而羥基化代謝物又接著在二相代謝中形成葡醛酸化代謝產(chǎn)物，代謝產(chǎn)物主要通過尿液排出體外。本研究首次對幾種丹參酮的混合代謝進行了研究，表明丹參成分之間在代謝過程中可互相轉化，影響各自的代謝行為。該結果進一步證實了

7、中藥整體藥效作用是由藥效成分之間相互作用而產(chǎn)生的說法。 3．采用高效液相色譜(HPLC)與電噴霧離子阱質(zhì)譜(ESI/ITMS)聯(lián)用技術，考察了丹參主要活性成分丹參酮ⅡA對西藥華法林(WAR)代謝過程的影響，嘗試對中西藥相互作用機理進行解釋。研究結果表明：丹參ⅡA可從兩個方面影響華法林的代謝，一方面會與華法林競爭酶代謝，使得華法林代謝速率減慢；另一方面又會與華法林競爭與血清蛋白的結合，使血液中游離態(tài)華法林濃度升高，從而加快華法林的

8、代謝速率。在體內(nèi)代謝實驗中，觀察到后者是影響華法林代謝的決定因素，因為在丹參酮ⅡA與華法林混合給藥情況下，經(jīng)歷相同的代謝時間后，在大鼠尿液及血液中檢測到大量的華法林代謝物，而在華法林單獨給藥的大鼠尿液和血液中則只能檢測到極少量代謝物的存在。實驗結果比較清楚地反映了丹參酮ⅡA與華法林相互作用的過程，并可由此對臨床上丹參與華法林相互作用的機理進行解釋。 4．發(fā)展了電噴霧飛行時間質(zhì)譜(ESI/TOFMS)技術用于蛋白-配體非共價復合物

9、的檢測，并利用該方法研究了丹參主要成分的水溶性衍生物(丹參酮ⅡA磺酸鈉，STS)與人血清白蛋白(HSA)的非共價相互作用以及STS對HSA與華法林(WAR)結合形成的復合物的影響。研究結果表明：丹參成分STS具有與HSA較高的結合能力，能與HSA以不同化學計量比形成非共價復合物；WAR也能與HSA高度結合，但在加入STS后，能觀察到HSA-WAR復合物含量明顯下降，而HSA-TS含量明顯升高，說明STS將WAR從其與HSA的結合位點上置