內皮細胞條件培養(yǎng)液IL-6對血管平滑肌細胞增殖和分泌的影響.pdf

1、目的:探討內皮細胞活化對血管平滑肌細胞增殖及分泌的的影響及其中機制。
　　 方法:(1)以不同濃度和不同干預時間的TNF-α刺激人臍靜脈內皮細胞(HUVEC),收集細胞上清液,用ELISA法測定內皮細胞IL-6的分泌,TUNEL法檢測內皮細胞的凋亡;(2)HUVEC培養(yǎng)液中分別加入10ng/mlTNF-α或不加入TNF-α24h后,收集上清離心,用0.22um的微孔濾膜過濾,4℃保存?zhèn)溆?分別為A液和B液;(3)將臍靜脈平滑肌細

2、胞接種于培養(yǎng)板中分為4組:①刺激組:按1:1比例加入A液和DMEM培養(yǎng)液,②拮抗組:在刺激組基礎上加入抗IL-6單抗,③對照組:按1:1比例加入B液和DMEM培養(yǎng)液,④空白組:僅加入DMEM培養(yǎng)液。分組后立即采集少量細胞上清液以ELISA法測定ICAM-1、IL-8水平。繼續(xù)培養(yǎng)24h后,再次采集上清液測定ICAM-1和IL-8水平,并收集血管平滑肌細胞以MTT法檢測平滑肌細胞增殖的情況。
　　 結果:1、TNF-α對血管內皮細

3、胞分泌和凋亡的影響:(1)TNF-α濃度和作用時間對血管內皮細胞分泌IL-6的影響:劑量效應:對照組:(31.2±2.9)pg/ml、5ng/ml組:(95.4±4.9)pg/ml、10ng/ml組:(122.7±6.3)pg/ml、20ng/ml組:(132.5±7.1)pg/ml、40ng/ml組:(79.1±5.9)pg/ml,時間效應:對照組:(12.4±1.6)pg/ml、6h組:(79.3±5.5)pg/ml、12h組:(9

4、7.5±3.9)pg/ml、24h組:022.7±6.3)pg/ml、48h組:(108.0±4.4)pg/ml;(2)TNF-α對血管內皮細胞凋亡的影響各時間點細胞凋亡指數(shù)測定:對照組:(0.029±0.004)、12h組:(0.140±0.005)、24h組:(0.255±0.006)、48h組:(0.329±0.013)。2、內皮細胞條件培養(yǎng)液對平滑肌細胞增殖和分泌的影響:(1)內皮細胞條件培養(yǎng)液對平滑肌細胞增殖的影響:四組細胞的

5、OD值依次為(1.349±0.115)、(1.176±0.093)、(1.012±0.087)和(0.798±0.014),組間比較有顯著性差異(F=2.315,P＜0.05);(2)內皮細胞條件培養(yǎng)液對平滑肌細胞分泌的影響:四組細胞上清液中ICAM-1和IL-8均較基線值有所增加,其中刺激組ICAM-1和IL-8分別較基線升高(0.222±0.044)ng/ml和(2.996±0.059)ng/ml,均高于拮抗劑組、對照組和空白組(P