柯里拉京對(duì)氧化應(yīng)激損傷SH-SY5Y和N9細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、福建醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文柯里拉京對(duì)氧化應(yīng)激損傷SHSY5Y和N9細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制研究姓名：陳一燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：藥理學(xué)（神經(jīng)藥理）指導(dǎo)教師：陳崇宏20100401本課題應(yīng)用人神經(jīng)母細(xì)胞瘤株(SHSY5Y細(xì)胞)和鼠小膠質(zhì)細(xì)胞(N9細(xì)胞)，建立氧化應(yīng)激損傷的體外細(xì)胞模型，探討柯罩拉京單體的神經(jīng)保護(hù)作用潛能。以叔丁基過(guò)氧化氫誘導(dǎo)損傷細(xì)胞，研究柯罩拉京對(duì)這兩種細(xì)胞的保護(hù)作用，觀察其對(duì)細(xì)胞抗氧化功能和自由基的影響；觀察柯里拉京對(duì)叔丁

2、基過(guò)氧化氫誘導(dǎo)SHSY5Y和N9細(xì)胞凋亡的抑制作用；觀察柯罩拉京對(duì)N9細(xì)胞過(guò)度激活引起的炎癥抑制作用：并對(duì)相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行探討，為神經(jīng)退行性病變的防治和新藥開(kāi)發(fā)提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2方法本課題首先應(yīng)用SRB法檢測(cè)柯里拉京本身的細(xì)胞毒性：通過(guò)MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性建立了叔丁基過(guò)氧化氫誘導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的體外模型；通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化以及MTT法和LDH釋放法檢測(cè)細(xì)胞損傷程度考察了柯罩拉京非藥物毒性劑量下預(yù)處理對(duì)體外細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保

3、護(hù)作用。通過(guò)熒光探針標(biāo)記，以熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)活性氧變化，以激光共聚焦和流式細(xì)胞技術(shù)觀察細(xì)胞線粒體膜電位變化；通過(guò)生化比色法檢測(cè)細(xì)胞總抗氧化能力TAOC、抗氧化酶SOD活力，脂質(zhì)過(guò)氧化等，探討柯里拉京抗氧化特性在對(duì)叔丁基過(guò)氧化氫誘導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用中的作用。通過(guò)AO／EB染色法觀察細(xì)胞形態(tài)、瓊脂糖凝膠電泳分析細(xì)胞DNA片段化和流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡峰；通過(guò)酶活性檢測(cè)、免疫印跡法等分析細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)分子的表達(dá)，探討柯里拉京抗細(xì)

4、胞凋亡作用及其可能機(jī)制。通過(guò)Griess法和比色法分別檢測(cè)細(xì)胞NO的分泌和NOS活力；以ELISA法檢測(cè)炎癥相關(guān)因子TNF0【；實(shí)時(shí)熒光PCR法相對(duì)定量分析細(xì)胞iNOSmRNA基因的表達(dá)；以熒光免疫法細(xì)胞原位檢測(cè)NFKB激活核轉(zhuǎn)錄等，探討柯罩拉京的抗炎特性及其在抗N9細(xì)胞過(guò)度激活引起炎性反應(yīng)的抑制作用。課題定量結(jié)果以均值標(biāo)準(zhǔn)差(；。)表示；組問(wèn)均數(shù)比較采用單因素方差分析和卜檢驗(yàn)法，P005為差異顯著。3結(jié)果(1)保護(hù)作用柯里拉京在高濃度