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文檔簡介
1、目的:
將重組腺病毒介導(dǎo)的mda-7/IL-24基因(melanoma differentiation-associated gene-7)轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移性人肝癌細胞HCCLM6,探索該基因治療對肝癌細胞侵襲力的作用.并通過檢測與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的生化指標來尋找mda-7/IL-24基因抗腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的可能機制。
方法:
構(gòu)建攜帶人mda-7/IL-24的重組腺病毒載體(Ad-mda-7);培養(yǎng)高轉(zhuǎn)移性人肝癌細胞H
2、CCLM6;將所培養(yǎng)的對數(shù)期細胞分組(1)實驗組:用攜帶人mda-7/IL-24的重組腺病毒載體(Ad-mda-7)干預(yù)高轉(zhuǎn)移性人肝癌細胞HCCLM6(2)對照組:用PBS干預(yù)高轉(zhuǎn)移性人肝癌細胞HCCLM6;顯微鏡下觀察各組細胞的生長增殖;用transwell分別檢測轉(zhuǎn)染MDA-7/IL-24基因組和PBS干預(yù)組,高轉(zhuǎn)移性人肝癌細胞HCCLM6侵襲力的不同;用RT-PCR分別檢測轉(zhuǎn)染MDA-7/IL-24基因組和PBS干預(yù)組各與侵襲轉(zhuǎn)移
3、相關(guān)的基因E-Cadherin,MMP-9和VEGF表達mRNA的表達水平;用Western Blot分別檢測轉(zhuǎn)染MDA-7/IL-24基因組和PBS干預(yù)組與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因E-Cadherin,MMP-9和VEGF表達蛋白的水平,分析各組蛋白水平的變化。
結(jié)果:
1.成功構(gòu)建重組腺病毒;
2.復(fù)制缺陷型腺病毒能介導(dǎo)外源基因MDA-7/IL-24在肝癌細胞中高效表達;
3.重組腺病毒介導(dǎo)的mda
4、-7/IL-24基因能促使肝癌細胞凋亡.
4.重組腺病毒介導(dǎo)的mda-7/IL-24基因轉(zhuǎn)染的高轉(zhuǎn)移性人肝癌細胞HCCLM6與對照組相比較,其侵襲力有明顯下降.
5.與對照組相比MDA-7/IL-24能明顯抑制肝癌細胞中VEGF和MMP-9的mRNA的表達,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P均小于0.05)。
6.與對照組相比MDA-7/IL-24能明顯促進肝癌細胞中E-Cadherin的mRNA的表達,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P
5、均小于0.05)。
7.與對照組相比MDA-7/IL-24能明顯抑制肝癌細胞中VEGF和MMP-9蛋白的表達,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P均小于0.05)。
8.與對照組相比MDA-7/IL-24能明顯促進肝癌細胞中E-Cadherin蛋白的表達,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P均小于0.05)。
結(jié)論:
復(fù)制缺陷型腺病毒載體Ad.mda-7能介導(dǎo)MDA-7/IL-24基因在高轉(zhuǎn)移性人肝癌細胞M6中高效表達,促使肝癌細胞
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