I型mGluR通過β-arrestin2組裝的信號模塊介導腦中風JNK3激活的信號通路的研究.pdf

1、目的:據(jù)報道β-arrestin2作為支架蛋白可以募集MAPK三級酶聯(lián)信號中ASK1,MKK4,和JNK3到激活的G蛋白偶聯(lián)受體上。但其作用在神經(jīng)細胞上尚未報道。本文將要探索缺血性腦損傷的一條新的激活JNK3的特有信號通路,即Ⅰ型代謝性谷氨酸受體(mGluR1)通過β-arrestin2募集和組裝的ASK1-MKK4-JNK3信號模塊激活JNIK3的信號通路,最終揭示這一信號通路導致缺血性腦中風神經(jīng)元凋亡的機制及藥物作用的可能靶點。

2、r>　　 方法:在大鼠四動脈結扎模型上,采用免疫共沉淀和免疫印跡的方法,觀察缺血后復灌不同的時間的樣本中,β-arrestin2介導ASK1-MKK4-JNK3信號模塊中蛋白之間相互關系及蛋白激酶激活的情況。腦室注射β-arrestin2的反義寡核苷酸,觀察β-arrestin2對組裝/NK3通路的特異性。采用側腦室給藥的方法,給予mGluR1的特異性拮抗劑,觀察藥物對β-arrestin2信號模塊組裝的影響,以及信號通路中相應蛋白的

3、表達和磷酸化水平的變化。采用組織學方法,觀察腦缺血復灌模型中,mGluR1特異性抑制劑對神經(jīng)元的保護作用。
　　 結果:
　　 1.腦缺復灌30min到5d的時間里β-arrestir2與ASK1的結合在6h,12h有明顯增強,并在6h達到高峰;與MKK4的結合在30min開始升高,并在6h達到高峰;與JNK3的結合在30分鐘后明顯增強,高峰出現(xiàn)在1d;ASK1、MKK4、JNK3的磷酸化高峰分別出現(xiàn)在1d,6h,3d。

4、
　　 2.缺血前腦室注射β-arrestin2反義寡核苷酸,可明顯抑制β-arrestin2與ASK1、MKK4、JNK3的結合,抑制三種蛋白激酶的磷酸化以及JNK下游底物c-Jun的磷酸化,減少海馬CA1區(qū)錐體細胞的死亡。
　　 3.缺血前腦室注射Ⅰ型mGluR抑制劑LY367385,可明顯減弱Ⅰ型mGluR與β-arrestin2之間的結合以及β-arrestin2與ASK1、MKK4、JNK3的結合,抑制三種激酶