Canstatin基因電脈沖導(dǎo)入肌肉對(duì)小鼠Lewis肺癌腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用.pdf_第1頁(yè)
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1、[目的]構(gòu)建人canstatin克隆載體及重組真核表達(dá)載體,觀察電脈沖介導(dǎo)骨骼肌內(nèi)canstatin基因轉(zhuǎn)移對(duì)小鼠Lewis肺癌皮下轉(zhuǎn)移瘤生長(zhǎng)和肺自發(fā)性轉(zhuǎn)移的影響.[方法]用RT-PCR方法從新鮮人胚肝臟組織中釣取canstatin全編碼區(qū)cDNA.將該片段重組入pGEM-T克隆載體后,重組載體經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切鑒定和DNA序列分析.從pGEM-T/canstatin克隆載體中,將人canstatin cDNA亞克隆入真核表達(dá)載體pEG

2、FP-N1,構(gòu)建含人canstatin cDNA的重組質(zhì)粒pEGFP-N1/canstatin將該重組質(zhì)粒通過(guò)電脈沖轉(zhuǎn)入荷瘤Lewis肺癌小鼠肌肉內(nèi),應(yīng)用RT-PCR、熒光顯微鏡測(cè)量熒光強(qiáng)度、腫瘤稱重、腫瘤體積測(cè)定及免疫組化的方法檢測(cè)canstatin基因在體內(nèi)的表達(dá)和抗腫瘤作用.[結(jié)論]1.成功構(gòu)建了重組克隆載體pGEM-T/canstatin和重組真核表達(dá)載體pEGFP-N1/canstatin.2.電脈沖介導(dǎo)的骨骼肌內(nèi)基因轉(zhuǎn)移法的

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