人參總皂苷對造血干-祖細胞促紅細胞生成素受體的作用.pdf

1、目的： 80年代以來，臍血作為造血干/祖細胞來源治療血液病患者的有效方法受到人們關注，由于臨床血液疾病治療的迫切需要，臍血造血干/祖細胞的臨床應用主要應用于血液系統(tǒng)惡性腫瘤及某些實體腫瘤的治療。臍血中含有較豐富的原始、能重建長期造血的干/祖細胞，具有較強的自我增殖、多向分化的能力，是造血干/祖細胞又一豐富來源。紅細胞生成素（Epo）是一種維系紅系祖細胞生存，增殖及分化成熟的重要造血調(diào)控因子。它通過與紅系祖細胞表面紅細胞生成素受體

2、（EpoR）結(jié)合，可調(diào)節(jié)紅系細胞增殖和分化。 人參是祖國傳統(tǒng)醫(yī)學的“補氣”要藥，人參總皂苷（TSPG）是其主要藥物有效成分。我室既往研究表明，TSPG能協(xié)同造血生長因子（Epo）促進CD34+造血干/祖細胞（HSC/HPC）向紅系細胞增殖分化；特別有意義的是，若不添加外源性生長因子TSPG則無此作用，提示TSPG以細胞因子依賴的方式促進紅系細胞發(fā)生。因此，我們設想TSPG可能通過調(diào)控EpoR發(fā)揮促進紅系細胞發(fā)生的作用。本研究以分

3、離純化的人臍血CD34+ HSC/HPC為靶細胞，初步探討TSPG對CD34+細胞EpoR表達的影響。 方法： 1、免疫磁珠法分選出臍血CD34+HSC/HPC，于體外培養(yǎng)，50 mg/LTSPG和100ng/ml干細胞因子（SCF）加入到CD34+ HSC/HPC的培養(yǎng)體系中作為TSPG組；對照組中只加入100ng/ml SCF。兩組均培養(yǎng)24小時后檢測以下指標。 2、采用流式細胞術分別檢測TSPG組與對照組E

4、poR陽性細胞的百分率。 3、采用半定量RT-PCR技術分別測定TSPG組與對照組細胞EpoRmRNA的表達。 4、采用激光共聚焦顯微鏡成像術觀察TSPG組與對照組細胞膜EpoR的分布。 5、采用紫外-可見分光光度儀檢測TSPG組與對照組細胞血紅蛋白的含量的變化。 結(jié)果： 1、流式細胞術檢測顯示：TSPG組細胞膜EpoR表達陽性的細胞百分率增加，與對照組相比差異有顯著性，P=0.035。

5、2、半定量RT-PCR檢測結(jié)果顯示：TSPG組細胞EpoR mRNA表達增加，與對照組相比差異有顯著性，P=0.016。 3、激光共聚焦顯微鏡成像術顯示：TSPG組細胞膜熒光強度明顯高于對照組。 4、血紅蛋白測定檢測結(jié)果顯示：50mg/L TSPG作用CD34+HSC/HPC24h后，其血紅蛋白的合成增加，與對照組相比差異有顯著性，P=0.037。 結(jié)論： 1、50 mg/L TSPG能夠使CD34+造血

6、干/祖細胞膜EpoR的陽性表達率增多。 2、50 mg/L TSPG能夠使CD34+造血干/祖細胞EpoR mRNA的表達增多。 3、50 mg/L TSPG可促進CD34+造血干/祖細胞向紅系分化。 目的： 白血病是人類好發(fā)的惡性腫瘤，是由于造血干細胞增殖分化異常而導致的惡性增殖性疾病。迄今白血病的治療仍主要采用傳統(tǒng)的大劑量聯(lián)合化療，但此療法副作用大，復發(fā)率高，而且對正常機體免疫與造血系統(tǒng)有極大的損害。

7、人參總皂苷（TSPG）是人參“補氣生血”或促進造血的有效成分。我們既往研究表明：TSPG對造血系統(tǒng)惡性腫瘤細胞的增殖有抑制作用，并可誘導其向終末細胞分化。但TSPG對白血病細胞增殖抑制及誘導分化的機理尚不清楚。已知K562細胞膜表面EpoR起著轉(zhuǎn)導抗凋亡信號作用，我們設想TSPG可能通過抑制EpoR蛋白的表達來誘導K562細胞凋亡，從而抑制其增殖。本研究采用體外細胞培養(yǎng)技術觀察TSPG對K562細胞的EpoR表達的影響，旨在闡述人參抗白

8、血病作用機理，這對于我們?yōu)榕R床尋找誘導白血病凋亡的藥物具有重要意義。 方法： 1、體外常規(guī)培養(yǎng)白血病細胞株K562。200 mg/L TSPG分別作用K562細胞0h、24h、48h、72h，進行以下檢測。 2、采用流式細胞術測定200 mg/L TSPG作用K562細胞24h、48h、72h后細胞膜表面EpoR表達的陽性率。 3、采用半定量RT-PCR測定200mg/L TSPG作用K562細胞24h、

9、48h、72h后EpoR mRNA表達的變化。 結(jié)果： 1、流式細胞術檢測顯示K562細胞膜表面EpoR表達的陽性率隨著200mg/L TSPG作用時間的延長而減少，P<0.05。 2、半定量RT-PCR檢測結(jié)果顯示K562細胞EpoR mRNA表達隨200mg/L TSPG作用時間的延長而顯著減少，P<0.01。 結(jié)論： 1、200mg/L TSPG可使K562細胞膜表面EpoR的表達陽性率減少