初探內(nèi)皮細(xì)胞膜微粒（EMPs）于體外對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能及凋亡的影響.pdf

1、股骨頭微循環(huán)障礙、血液高凝傾向和小血管阻塞是激素性股骨頭壞死諸多發(fā)病機(jī)制中比較重要的機(jī)制。內(nèi)皮細(xì)胞膜微粒(EMPs)是由內(nèi)皮細(xì)胞分泌，磷脂膜包被的微小囊泡結(jié)構(gòu)，具有影響血液凝血系統(tǒng)、血管舒張功能，且與多種內(nèi)皮損傷性血栓及炎癥疾病相關(guān)。同時(shí)EMPs參與細(xì)胞凋亡、活化、炎癥細(xì)胞募集等多種病生理過程。 目的：探討體外試驗(yàn)中，激素對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞EMPs釋放的影響．探討EMPs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞自身的影響，包括內(nèi)皮功能和凋亡兩方面，進(jìn)而初探EMPs

2、在激素相關(guān)性股骨頭缺血壞死機(jī)制中的作用． 方法：實(shí)驗(yàn)對(duì)象：實(shí)驗(yàn)中選擇體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)刺激物：激素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中使用DEX激素，EMPs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞影響實(shí)驗(yàn)則選擇內(nèi)皮細(xì)胞自分泌的EMPs。檢測(cè)方法：EMPs和內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)一段時(shí)間后倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)EMPs數(shù)量，隨后用Bradford法測(cè)BSA(Bovine Serum Albumin)濃度值，判斷內(nèi)皮細(xì)胞通透性變化。以Caspa

3、se-3試劑盒和Annexin-V FITC試劑盒測(cè)定細(xì)胞凋亡狀況，RT-PCR檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)。 結(jié)果：1.流式細(xì)胞儀分析：10mM濃度激素刺激24h，內(nèi)皮細(xì)胞釋放EMPs達(dá)到最大。2.中、高濃度EMPs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞通透性產(chǎn)生損傷，低濃度無明顯差異。3.試劑盒檢測(cè)結(jié)果：高中低濃度EMPs內(nèi)皮細(xì)胞Caspase-3、PS活性表達(dá)均高于對(duì)照。4.Realtime-PCR、RT-PCR分析凋亡基因：高、中濃度EMPs組APA

4、F-1、AIF基因表達(dá)較對(duì)照增高，低濃度組沒有明顯差異。 結(jié)論：1.DEX在10mM，24h條件下刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生最大量的EMPs2.7.66*104和7.66*103個(gè)/ml濃度EMPs對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞通透性可引起損傷，但7.66*102個(gè)/mlEMPs則不會(huì)對(duì)內(nèi)皮產(chǎn)生明顯損傷。3.7.66*104、7.66*103、7.66*102個(gè)/ml濃度EMPs均促內(nèi)皮細(xì)胞凋亡發(fā)生；Caspase-3、PS活性表達(dá)均增高。4.7.66*10