SiRNA沉默酸性鞘磷脂酶基因對GV期卵子凋亡的保護作用研究.pdf

1、中山大學博士學位論文SiRNA沉默酸性鞘磷脂酶基因對GV期卵子凋亡的保護作用研究姓名：馬蕓申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：陳系古20070608中出大學博七學位論文SiRNA沉默酸性鞘磷脂酶基岡中文摘要絲裂霉素誘導NIH3T3細胞的凋亡與鞘磷脂通路有關。免疫熒光示SMPDl分布于GV期隳子至囊胚細胞膜和細胞質中。靶向smpdl的siRNA娃微注射到Gv卵子的胞漿中后，SMPDl蛋自水平隨注射時聞而下降，24hSMPD

2、l蛋白下降約90％。暴露予表阿霉素(EPI)40h后出現(xiàn)胞漿碎裂等退化表型。與來注射和注射陰性對照及緩沖液的卵子相比，注射smpdlsiRNA的卵子細胞內EPI蓄積明顯少于對照GV卵。AnnexinV／PI／Hoechst33342染色和單綴胞凝膠電泳(彗星實驗)方法發(fā)現(xiàn)注射siRNA可以對抗EPI產生的損傷作用，與smpdl基因敲除實驗的結果～致。l結論1：靶彝Smpdl基因的siRNA沉默酸性鞘磷臘酶基因在小鼠胚胎成纖維細胞系NIH

3、3T3和GV期卵子中具有一定對抗化療藥物絲裂霉素和表阿霉素誘導凋亡的作用。SmpdlsiRNA可能成為對抗卵子化療中凋亡的新方法。l關鍵詞l：酸性鞘磷脂酶，小干擾孩糖核酸，生發(fā)泡期卵母細胞，凋亡第二部分肺癌分子病理分期研究曩的：即使是努科手術療效較好的沿期非小細胞肺癌病人，5年生存率僅在70％左右，即約30％的病人在5年內死亡。目前的分期系統(tǒng)無法發(fā)現(xiàn)此類高危病人。本研究試圖利用多個分子標記物組合來個體化預測IB期非小細胞肺癌的預后。方法

4、：對148例lB期非小細胞肺癌的癌組織進行了33種分子標記物的檢測。然后利用其中73例病人的I窿床病理特征及預后資料，結合33種分子標記物的表達狀態(tài)，用支持向量機方法篩選構建三種IB期非小細胞肺癌個體化預后預測模型。最后利用剩余的75例病人對以上三種模型進行了驗證。結果：構建了三種基于免疫組化和支持向量桃的lB期小細胞肺癌個體化預后預測模型，包括SVMl，SVM2和SVM3。SVMl由病人年齡、病理類型和5種分子標記物(CD34MVD、

5、EMA、p21ras、p21WAFl和TIMP2)構成。SVM2壺病人年齡、病理類型和19種分子標記物(BCL2、caspase9、CD34MVD、lowmolecularweightcytokeratin、high—molecularweightcytokemtin、cyclooxygenase一2，EMA，HER2，MMP一2，MMP一9，p16、p21ras，p21WAFl、p27kipI、p53、TIMP1、TIMP2、VEGF

6、和13一catenin)構成。SVM3則由SVMl和SVM2組合麗成。單因素和多因素分析證明對于根治術后的lB期非小細胞肺癌，這三種SVM模型是獨立的預后因子，并迸一步在75例IB期非小細胞肺癌進行了個體化預后預測驗證。SVMl將全組148例病人分為高風險組4l例vs。低風險組107例，高風險組l、3、5年總的累計生存率分別是65。9％、220％和7。3％，低風險組l、3、5年總的累計生存率分別是953％、897％和887％。SVMl將