密度蛋白、β-鏈蛋白在原發(fā)性膜性腎病腎小球內(nèi)的表達(dá)變化及意義.pdf

1、目的：隨著對(duì)慢性腎臟病的深入研究，已發(fā)現(xiàn)腎小球臟層上皮細(xì)胞即足細(xì)胞的裂孔隔膜結(jié)構(gòu)和功能與腎小球?yàn)V過屏障有關(guān)、足細(xì)胞和裂孔隔膜相關(guān)蛋白的變化與足細(xì)胞裂孔隔膜的形態(tài)、功能和蛋白尿的發(fā)生密切相關(guān)。因此，裂孔隔膜蛋白變化與腎臟疾病關(guān)系的研究一直為人們所關(guān)注。 密度蛋白(densin)和β-鏈蛋白(beta-catenin)是近年來發(fā)現(xiàn)的足細(xì)胞蛋白，被認(rèn)為與腎小球足細(xì)胞和裂孔隔膜的形態(tài)與功能有關(guān)。密度蛋白作為O-唾液酸蛋白家族的跨膜蛋白，

2、最早由老鼠的前腦突觸后密度區(qū)提取，屬于富含亮氨酸重復(fù)序列和PSD-95/DIg-A/ZO(PDZ)區(qū)所組成的LAP蛋白家族。β-鏈蛋白被認(rèn)為是密度蛋白的伴侶蛋白，與密度蛋白的功能不可分割。密度蛋白和β-鏈蛋白分布于腎小球足細(xì)胞和足細(xì)胞連接部位，是腎小球足細(xì)胞裂孔膜的重要組成部分。密度蛋白與F-肌動(dòng)蛋白關(guān)系密切，密度蛋白可能以不同的方式與足細(xì)胞細(xì)胞骨架連接，密度蛋白與β-鏈蛋白的相互作用提供了一種通過α-鏈蛋白(alpha-catenin

3、)與細(xì)胞骨架的連接。已知α-鏈蛋白與β-鏈蛋白和F-肌動(dòng)蛋白相互作用，并因此把鏈蛋白/鈣粘蛋白復(fù)合物(catenin/cadherin complex)連到細(xì)胞骨架。密度蛋白可能與黏附連接蛋白β-鏈蛋白可能共同發(fā)揮作用把鈣粘蛋白、鏈蛋白和nephrin復(fù)合物連接到肌動(dòng)蛋白(actin)細(xì)胞骨架與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。密度蛋白和β-鏈蛋白與足細(xì)胞病之一的原發(fā)性膜性腎病(IMN)的關(guān)系尚未探討。本研究旨在利用免疫組化的方法了解密度蛋白(densin

4、)和β-鏈蛋白(beta-catenin)在原發(fā)性膜性腎病患者腎小球內(nèi)的表達(dá)變化及其與蛋白尿，血肌酐等指標(biāo)的關(guān)系，探討密度蛋白和β-鏈蛋白對(duì)IMN患者的影響。 方法：病例來源于2007年1月至2007年12月期間在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腎內(nèi)科病房診治的31例原發(fā)性膜性腎病患者。對(duì)照者來自同期河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科病房診治5例已行一側(cè)腫瘤腎切除后證實(shí)為良性腎臟腫瘤腎的患者。應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)(PV法)，分別檢測25例Ⅰ期IM

5、N患者(Ⅰ期IMN組)、5例Ⅱ期及1例Ⅲ期IMN患者(Ⅱ+Ⅲ期IMN組)和5例因腎腫瘤行一側(cè)腫瘤腎切除后被證實(shí)為腎良性腫瘤的患者(對(duì)照組)腎小球內(nèi)密度蛋白和β-鏈蛋白的表達(dá)變化并與各組受試者尿蛋白等指標(biāo)水平進(jìn)行直線相關(guān)性分析。一抗為兔抗人β-鏈蛋白多克隆抗體和鼠抗人密度蛋白多克隆抗體。 結(jié)果：1臨床實(shí)驗(yàn)指標(biāo)：31例特發(fā)性膜性腎病組患者，平均年齡(50.74±10.64)與正常對(duì)照組，平均年齡(55.60±10.12)比較，在年齡

6、構(gòu)成上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；正常對(duì)照組的的24小時(shí)尿蛋白定量、血肌酐分別為：(0.05±0.03g/24h)、(63.74±8.95μmol/L)；Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組、Ⅰ-Ⅲ期IMN組24小時(shí)尿蛋白定量分別為：(4.51±2.23 g/24h)、(4.78±2.16g/24h)、(4.56±2.26 g/24h)；Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組、Ⅰ-Ⅲ期IMN組血肌酐分別為：(72.02±11.87μmol/L)、(

7、76.30±6.50μmol/L)、(72.85±11.08μmaol/L)。2 免疫組織化學(xué)結(jié)果：2.1 密度蛋白在對(duì)照組正常腎組織的腎小球足細(xì)胞和IMN患者腎小球足細(xì)胞均有表達(dá)。在IMN組、Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組及對(duì)照組腎小球的密度蛋白表達(dá)的陽性面積率值分別為：(30.69±11.96)、(34.46±9.95)、(14.98±3.93)、(49.56±4.89)。密度蛋白在IMN組、Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組腎小球內(nèi)的

8、表達(dá)均較對(duì)照組顯著減弱(分別為P<0.01，P<0.05，P<0.001)；密度蛋白在Ⅱ+Ⅲ期IMN組腎小球內(nèi)的表達(dá)較Ⅰ期IMN組顯著減弱(P<0.001)。2.2 β-鏈蛋白在對(duì)照組正常腎組織的腎小球足細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞及腎小管上皮細(xì)胞和IMN患者腎小球足細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞及腎小管上皮細(xì)胞均表達(dá)。在IMN組、Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組及對(duì)照組腎小球的密度蛋白表達(dá)的陽性面積率值分別為：(35.49±11.75)、(39.

9、66±8.75)、(18.10±3.30)、(59.16±4.34)。β-鏈蛋白在IMN組、Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組腎小球內(nèi)的表達(dá)均較對(duì)照組顯著減弱(P均<0.001)；β-鏈蛋白在Ⅱ+Ⅲ期IMN組腎小球內(nèi)的表達(dá)較Ⅰ期IMN組顯著減弱(P<0.001)。2.3 IMN組腎小球內(nèi)密度蛋白的表達(dá)與β-鏈蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.718，P=0.001)。2.4 IMN組腎小球內(nèi)密度蛋白的表達(dá)與24小時(shí)尿蛋白定量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=

10、-0.581，P=0.001)，而與血白蛋白、血肌酐、血脂、免疫球蛋白及血尿酸無明顯相關(guān)性。IMN組腎組織內(nèi)β-鏈蛋白的表達(dá)與24小時(shí)尿蛋白定量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.550，P=0.001)，與血白蛋白、血肌酐、免疫球蛋白IgG及血尿酸無明顯相關(guān)性。2.5 IMN組24小時(shí)尿蛋白定量明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。 結(jié)論：1.腎小球內(nèi)密度蛋白特異性地表達(dá)于足細(xì)胞。密度蛋白在IMN組的表達(dá)較正常對(duì)照組組顯著減弱，且密度蛋白在IM