復方中藥玉屏風多糖的免疫調(diào)節(jié)作用及其機理的研究.pdf

1、玉屏風散是中醫(yī)益氣固表的代表名方，在近代臨床醫(yī)療中被廣泛地應用于與免疫功能失調(diào)有關的多種疾病的治療。近代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，玉屏風散對免疫功能具有調(diào)節(jié)作用。運用藥物化學與藥理學密切結合的方法，從玉屏風散中篩選分離出活性部位玉屏風多糖，本研究旨在評價玉屏風多糖的免疫調(diào)節(jié)活性，并探討其免疫調(diào)節(jié)作用的機理。 1：目的：運用藥物化學與藥理學密切結合的方法，將玉屏風散視為一個整體，從湯劑出發(fā)，在藥理學藥效指標的指導下，對其發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的活

2、性部位進行篩選。 方法：采用環(huán)磷酰胺(Cy)誘導的免疫功能低下小鼠作為整體動物模型，采用脾淋巴細胞的定量溶血試驗(QHS，抗體生成試驗)和LPS、ConA誘導的淋巴細胞增殖反應作為評價免疫功能的指標。 結論：提示50％醇沉部分可能包含調(diào)節(jié)免疫功能的活性成分。 2：目的：玉屏風多糖(YPF-P)是50％醇沉部分純化獲得的多糖成分。本部分實驗用非特異性免疫及體液免疫、細胞免疫的相關指標，評價YPF-P對Cy誘導的免疫

3、功能低下小鼠的免疫功能的影響。同時以免疫功能低下的遲發(fā)型變態(tài)反應(DTH)小鼠脾淋巴細胞為靶細胞，觀察了YPF-P對其影響，為闡明YPF．P作用機理積累實驗資料。 方法：采用Cy誘導的小鼠免疫低下模型，分別測定腹腔巨噬細胞(PMtI))吞噬功能和NK細胞殺傷活性，以及脾淋巴細胞的定量溶血及LPS、ConA誘導的淋巴細胞增殖反應。并采用DNFB誘導的DTH觀察細胞免疫功能：采用三色流式細胞技術分析脾細胞淋巴細胞CD3+、CD4+、

4、CD8+細胞亞群；ELISA法檢測脾細胞產(chǎn)生細胞因子IL-2、IFN-7、IL-4水平，同時用RT-PCR技術檢測IL-2、IFN-7、IL-4mRNA表達，以反映YPF-P對細胞因子分泌的及Thl、Th2細胞亞群功能的影響。 結論：YPF-P對Cy引起的非特異性免疫、體液免疫和細胞免疫功能的低下均有不同程度的改善作用，可能是玉屏風散發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎之一。YPF-P能改善Cy對淋巴細胞的抑制，改善CD4+／CD8+細胞的失衡。能

5、糾正Cy引起的IL-2、IFN-7的紊亂。可能主要通過影響Thl細胞功能而實現(xiàn)。 3、目的：以大鼠佐劑型關節(jié)炎模型(AA)所活化的巨噬細胞為靶細胞，觀察YPF-P對其細胞因子以及MAPK和NF-r．B通路的信號轉(zhuǎn)導的影響。 方法：弗氏完全佐劑誘導大鼠AA模型，以關節(jié)腫脹度、屈關節(jié)疼痛評分、多發(fā)性關節(jié)炎指數(shù)、體重及免疫器官重量等評價YPF-P對AA模型作用；分離培養(yǎng)PMtI)，測定吞噬功能，以ELISA法測定Mci)產(chǎn)生的

6、IL．1p、TNF-a和IL．10，以RT-PCR法檢測IL．1D、TNF-a和IL．10mRNA表達；電泳遷移率改變分析法檢測MtI)的NF-r,B的活性，同時以Westernblot分析Ir,B，以觀察NF-r,B通路的信號轉(zhuǎn)導的情況：以Westernblot分析磷酸化38MAPK、ERKl／2、JNK水平以反映MAPK信號轉(zhuǎn)導情況。 結論：YPF-P可改善AA大鼠關節(jié)炎癥狀。它可能是緩解了TNF-a和IL．1持續(xù)刺激從而調(diào)

7、整了MtI)的異?；罨?。YPF-P顯著降低了P38MAPK和ERKl／2的磷酸化，尤其是p38MAPK抑制程度更高，表明P38MAPK通路可能是YPF-P影響MΦ的重要途徑之一。YPF-P可以改善AA模型大鼠的NK-r．B的失調(diào)，其作用可能影響到NF．KB和I-r,B的活性，改善了其失衡狀態(tài)。 總之，玉屏風散的水溶性成分中50％醇沉部分免疫調(diào)節(jié)活性較強。分離的YPF-P能夠改善Cy引起的非特異性免疫、體液和細胞免疫功能的低下。Y