基于小鼠乳腺癌模型的Tregs細胞和NKT細胞在腫瘤免疫作用中的研究.pdf

1、機體的免疫狀態(tài)與腫瘤的發(fā)生有密切關系，Burnett和Thomas提出了免疫監(jiān)視學說認為正常機體的免疫系統(tǒng)通過細胞免疫機制識別并特異地殺傷突變細胞，如果機體的免疫功能低下、紊亂或受抑制，突變細胞沒有被清除，就形成腫瘤。腫瘤發(fā)生后，機體抗腫瘤免疫的機制包括細胞免疫和體液免疫兩方面，其中細胞免疫是抗腫瘤免疫的主要方式。
　　 樹突狀細胞是腫瘤免疫反應的中心環(huán)節(jié)，這足因為樹突狀細胞(DC)是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強的專職性抗原遞呈細胞(AP

2、C)，參與抗原的識別、加工處理與提呈，高表達主要組織相容性復合物(MHC)-Ⅱ類分子、共刺激分子，并分泌高水平輔助性T淋巴細胞(TH)I型細胞因子白介素-12,有效地激活T細胞，引發(fā)機體產生抗腫瘤免疫應答。
　　 a-galactosyiceramide(α-GalCer)是一種海綿糖脂，α-Galcer的脂質部分與DC細胞疏水性的CDld抗原區(qū)結合，糖類部分與NKT細胞的TCR結合，因此由CDld呈遞的α-Galcer抗原可以

3、直接或間接激活了NKT細胞，在體內形成NKT細胞依賴的腫瘤排斥。NKT細胞足T細胞的一個特殊的亞群，其表面的TCR可以特異的識別糖脂類抗原并與DC細胞表面提呈了糖脂配體的CDld分子結合。NKT細胞在腫瘤免疫過程中可以發(fā)揮孑然不同的兩種作用:一方面，NKT細胞被激活后，釋放大量細胞因子(包括IL-4，IFN-γ)和穿孔素(Pfp)等，殺傷腫瘤細胞，發(fā)揮明顯的抗腫瘤效應。另一方面，NKT細胞通過分泌IL-13，抑制CTL介導的抗腫瘤免疫反

4、應，這個過程與CD4+CD25+調節(jié)性T細胞(Tregs)有關。Tregs細胞也是T細胞的一個特殊的亞群，是一種調節(jié)性細胞，是機體外周耐受的一個重要的組成部分，并且起著抑制腫瘤免疫的作用。通過抗一CD25單克隆抗體剔除Tregs細胞可以增加腫瘤的免疫監(jiān)視作用和對多種腫瘤的排斥作用。
　　 最近的研究指出Tregs和NKT細胞能夠相互的影響，并且調節(jié)其他類型的免疫細胞。NKT細胞在腫瘤免疫反應中具有兩方面的作用，在某種條件下可能是

5、抑制作用，而在另外一種條件下可能是促進作用；用抗-CD25單抗剔除Tregs細胞后，腫瘤免疫作用足增強的；由α-GalCer激活的NKT細胞也是促進腫瘤免疫的，那么在小鼠乳腺癌的治療過程中聯(lián)合應用抗-CD25單抗和α-GalCer治療，是否具有協(xié)同作用?在這種實驗條件下，在Tregs細胞存在和/或剔除狀態(tài)下，NKT細胞與Tregs細胞之間的關系是怎樣的?這些問題的解決對于更好的了解Tregs細胞和NKT細胞在腫瘤免疫中的作用機制，更好的

6、將Tregs細胞和NKT細胞應用于臨床，提供理論基礎。
　　 主要的研究內容:
　　 1.PC61單克隆抗體的制備:體內接種雜交瘤細胞，制備腹水，通過腹水生產抗-CD25單克隆抗體；通過淋巴細胞活化實驗檢測腹水中抗體活性；用Protein G親和層析的方法純化得到高純度抗-CD25單克隆抗體；最后通過剔除動物體內的CD4+CD25+T細胞來檢測純化抗體的活性。
　　 2.提取小鼠骨髓細胞，在GM-CSF存在的條件

7、下誘導培養(yǎng)出DC細胞，DC細胞先后用α-GalCe和LPS處理，獲得成熟的攜帶有抗原的DC細胞；
　　 3.利用純化的PC61抗體剔除小鼠體內的Tregs細胞，然后接種腫瘤同時給予處理的mDC細胞和/或α-GalCer治療組；同時設立未剔除Tregs細胞的mDC細胞和/或α-GalCer治療組
　　 結果表明:
　　 ①剔除Tregs細胞小鼠的各治療組(mDC+PC61,α-GaiCer+PC61,mDC+α-G

8、alCer+PC61)的生存時間明顯高于未剔除Tregs細胞的各治療組(mDC，α-GalCer，mDC+α-GalCer)；
　　 ②剔除Tregs細胞的α-GaICer治療組、mDC+α-GalCer治療組及單純PC61剔除組小鼠出現(xiàn)腫瘤消退，而未剔除’Fregs細胞的各治療組(mDC，甜GalCer，mDC+α-GalCer)沒有出現(xiàn)這種現(xiàn)象；
　　 ③剔除 Tregs細胞的各實驗組(mDC+PC61,α-GalC

9、er+PC61,mDC+α-GalCer+PC61)小鼠的腫瘤生長速度和腫瘤大小明顯低于同期未剔除Tregs細胞的各治療組(mDC，α-GalCer，mDC+α-GalCer)；
　　 ④剔除。Tregs細胞的α-GalCer治療組、mDC+α-GalCer治療組及單純PC61治療組的小鼠的肺表面轉移腫瘤數(shù)量明顯低于未剔除Tregs細胞的治療組(mDC，α-GalCer，mDC+α-GalCer)；
　　 ⑤病理學形態(tài)觀

10、察肝臟，脾臟，肺臟HE染色:對照組和單純給予單抗治療組這兩組的肝臟內淋巴細胞浸潤明顯少于其他各治療組；對照組和各實驗組，肺臟和脾臟內均有大量的淋巴細胞浸潤，沒有明顯的區(qū)別；
　　 ⑥流式結果檢測:利用小鼠CDld:Ig融合蛋白檢測肝臟，脾臟內的NKT。細胞；單純PC61治療組肝臟和脾臟NKT細胞與對照組差別不大，其余各實驗組數(shù)據(jù)均高于對照組。在未用單抗治療組，肝臟內NKT細胞數(shù)量與動物牛存率呈現(xiàn)正相關的趨勢；在加入單抗治療以后，