免疫球蛋白結合分子定點隨機突變組合噬菌體展示文庫的構建.pdf

1、目的：構建免疫球蛋白結合分子定點隨機突變組合噬菌體展示文庫，為應用各種類型免疫球蛋白對該文庫進行體外分子進化篩選及研究免疫球蛋白結合分子結構和功能打下基礎。 方法：應用overlapping PCR制備Protein A的Z結構域。再用含隨機核苷酸序列的引物，制備對Z結構域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸進行隨機突變的定點隨機突變體，并在突變體片段兩端引入 Kpn Ⅰ位點，3′端引入3個氨基酸大小隨機連接肽的序列進

2、行隨機連接。突變體片段經(jīng)KpnⅠ酶切后，克隆于噬菌粒展示載體pCANTAB5S?？寺‘a(chǎn)物轉化大腸桿菌TG1，輔助噬菌體M13K07拯救，構建噬菌體展示定點隨機突變組合文庫。 結果：該定點隨機突變組合文庫的庫容為2.7×10<'7>個，滴度為1.4×10<'12>TU·mL<'-1>；文庫中含0.72以上的陽性克隆，其中有2個單結構域的陽性克隆占0.15；15個樣品的序列分析顯示各突變位點和隨機連接肽的氨基酸序列呈隨機性分布。