便秘型腸易激綜合征模型大鼠腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞的研究.pdf

1、【背景與目的】腸易激綜合征(IBS)是常見(jiàn)的功能性腸病，發(fā)病機(jī)制尚不清楚。由于在人體取材研究非常困難，因此建立IBS動(dòng)物模型，對(duì)于探討IBS的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。本研究在已建立的C-IBS大鼠模型基礎(chǔ)上，重復(fù)驗(yàn)證和完善該模型，使之具有較好的模擬性、重復(fù)性和穩(wěn)定性；同時(shí)研究該模型大鼠腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)、肥大細(xì)胞(MC)和5-羥色胺(5-HT)的變化，為IBS的發(fā)病機(jī)制提供新的線索和依據(jù)。 【方法】Wistar大鼠5

2、6只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組。A組24只，冰水灌胃4周，又分為A1、A2、A3組，每組8只，分別于灌胃結(jié)束后即刻、2周、4周停止觀察。B組8只，冰水灌胃2周，于灌胃結(jié)束4周停止觀察。C組24只，為正常對(duì)照組，正常飼養(yǎng)不灌胃，又分為C1、C2、C3兩組，每組8只，分別觀察4周、6周和8周。主要觀察A、B和C3組大鼠每天糞便粒數(shù)及含水量的變化。在觀察結(jié)束后，對(duì)A組和C組大鼠進(jìn)行直結(jié)腸擴(kuò)張，并應(yīng)用腹部撤離反射(AWR)評(píng)分，評(píng)價(jià)腸道敏感性。應(yīng)

3、用甲苯胺藍(lán)染色研究A、C組大鼠回盲部和結(jié)腸的MC計(jì)數(shù)，應(yīng)用免疫組化染色法研究5-HT在腸道的表達(dá)。對(duì)A、C組大鼠的小腸、回盲部及結(jié)腸肌層，我們應(yīng)用免疫組化染色法研究c-kit陽(yáng)性ICC的表達(dá)，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)方法研究c-kit基因mRNA的表達(dá)，應(yīng)用透射電鏡研究ICC的超微結(jié)構(gòu)。 【結(jié)果】A組大鼠冰水灌胃后第2-8周與C3組大鼠相比，24h糞便粒數(shù)明顯減少(P＜0.05)，含水量明顯降低(P＜0.05)。B組大鼠冰水灌胃后

4、第2-4周與C3組大鼠相比，24h糞便粒數(shù)明顯減少(P＜0.05)，含水量明顯降低(P＜0.05)。以后有所上升，糞便含水量于第5周與C3組相比已無(wú)顯著差異(P＞0.05)，糞便粒數(shù)至第6周仍明顯低于C3組大鼠(P＜0.05)。 造模時(shí)間對(duì)大鼠腸道敏感性無(wú)明顯影響(P＞0.05)。冰水灌胃對(duì)大鼠痛覺(jué)敏感容量閾值和痛覺(jué)最大耐受容量閾值有顯著影響(P＜0.05)。A組大鼠痛覺(jué)敏感容量閾值為1.07±0.19ml明顯高于C組大鼠0.9

5、1±0.16ml(P＜0.05)。A組大鼠痛覺(jué)最大耐受容量閾值為1.77±0.21ml明顯高于C組大鼠1.58±0.23ml(P＜0.05)。在AWR評(píng)分1-4分中，雌性大鼠的容量閾值依次為0.61±0.10ml、0.91±0.16ml、1.26±0.19ml、1.57±0.20ml，與雄性大鼠0.76±0.17ml、1.09±0.19ml、1.45±0.23ml、1.78±0.23ml相比，均明顯降低(P＜0.05)；A組雌性大鼠的容

6、量閾值依次為0.65±0.10ml、0.98±0.16ml、1.37±0.15ml、1.65±0.19ml，與雄性大鼠0.81±0.20ml、1.20±0.15ml、1.59±0.16ml、1.91±0.13ml相比，均明顯降低(P＜0.05)。C組雌性大鼠的容量閾值與C組雄性大鼠相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)。 與C組相比，A組大鼠回盲部和結(jié)腸MC計(jì)數(shù)顯著增多(P＜0.05)，5-HT陽(yáng)性表達(dá)顯著增強(qiáng)(P＜0.05)。A組大鼠

7、小腸肌層c-kit陽(yáng)性ICC的積分光密度(IOD)和陽(yáng)性面積與C組相比均顯著增高(P＜0.05)，光密度無(wú)顯著差異(P＞0.05)；A組大鼠結(jié)腸肌層c-kit陽(yáng)性ICC的光密度、積分光密度(IOD)和陽(yáng)性面積與C組相比均顯著增高(P＜0.05)；A組大鼠回盲部肌層c-kit陽(yáng)性ICC與C組相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)。A組大鼠小腸和結(jié)腸肌層c-kit基因mRNA的IOD比值與C組相比均顯著降低(P＜0.05)。電鏡下，A組大鼠小腸和結(jié)