菊芋花瓣懸浮培養(yǎng)細胞的酚類物質(zhì)分析.pdf

1、菊芋(Helianthus tuberosus L.)是菊科向日葵屬多年生草本植物，原產(chǎn)于北美洲，現(xiàn)在在世界范圍內(nèi)廣泛種植。與傳統(tǒng)農(nóng)作物相比，菊芋具有生產(chǎn)投入低，生物量大，不易染病等一系列的優(yōu)點，成為當前研究的熱點植物。菊芋葉片和塊莖次生代謝物質(zhì)的研究已經(jīng)不少，但是關于菊芋花瓣的研究還未見報道。本實驗以菊芋花瓣為研究材料，誘導了菊芋花瓣的愈傷組織、懸浮細胞，測定了花瓣愈傷組織、花瓣懸浮細胞、花瓣、花盤中的總酚、總黃酮含量，并使用FRAP

2、、DPPH、ABTS三種抗氧化方法，對提取物的體外抗氧化活性進行了測定。
　　(1)以菊芋花瓣為外植體，建立了菊芋花瓣的懸浮培養(yǎng)體系。花瓣愈傷組織的誘導在MS培養(yǎng)基上進行，篩選的最佳植物激素組合為NAA1mg/L+6-BA2mg/L，記錄愈傷組織繼代培養(yǎng)7周內(nèi)的細胞鮮重，發(fā)現(xiàn)愈傷組織在2-5周進入對數(shù)生長期，在一周的穩(wěn)定期后進入衰亡期。使用疏松透明的愈傷組織在相同的MS液體培養(yǎng)基中得到懸浮細胞，優(yōu)化了培養(yǎng)基的碳源和氮源，確定培養(yǎng)基

3、中蔗糖濃度為30g/L，外加氮源的組合為谷氨酸0.5mg/L+谷氨酰胺1mg/L。測定了花瓣懸浮細胞的生長曲線，在第6-24天進入對數(shù)生長期，24-33天為穩(wěn)定期，33天后進入衰亡期。
　　(2)使用60％的乙醇為提取劑，測定了不同生長時期的菊芋花瓣懸浮細胞、愈傷組織總酚、總黃酮含量，發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定期的花瓣懸浮細胞總酚、總黃酮含量最高，分別為15.02mgGAE/gDW和8.03mgQE/gDW。對菊芋花瓣和花盤中的總酚、總黃酮含量也進

4、行了測定，其中花瓣中總酚、總黃酮含量分別為8.67mgGAE/gDW和5.39mgQE/gDW，低于懸浮細胞中的含量。以14種酚類物質(zhì)作為標品，使用超效液相色譜法測定了這14種酚類物質(zhì)在植物材料中的含量，結(jié)果表明菊芋花瓣、花瓣愈傷組織和花瓣懸浮細胞中都檢測到了這14種酚類物質(zhì)，花盤中檢測到11種。其中7種酚類物質(zhì)（兒茶素、咖啡酸、水楊酸、3-羥基苯甲酸、阿魏酸、芥子酸、4-羥基香豆素）在懸浮細胞中含量最高，5種（沒食子酸、原兒茶酸、綠原

5、酸、表兒茶素、東莨菪內(nèi)脂）在花瓣愈傷組織中含量最高，4-羥基苯甲酸在花瓣中含量最高，槲皮素在花盤中含量最高。
　　(3)使用FRAP、DPPH、ABTS三種抗氧化方法對菊芋花瓣懸浮細胞等提取物的體外抗氧化活性進行測定。結(jié)果表明，在菊芋花瓣愈傷組織和花瓣懸浮細胞生長過程中，穩(wěn)定期的愈傷組織和懸浮細胞提取物在這3種方法的檢測下都具有最高的抗氧化活性。以菊芋花瓣、花盤為對照，菊芋花瓣懸浮細胞的FRAP抗氧化活性最高為9.07mgTE/g