NSCLC患者DNA修復(fù)基因XPD多態(tài)性與p53基因突變的相關(guān)性分析.pdf

1、肺癌是當(dāng)今世界各地最常見的惡性腫瘤之一，其病因?qū)W尚不清楚。個體基因易感性及吸煙被認(rèn)為與肺癌發(fā)病風(fēng)險相關(guān)。抑癌基因p53基因突變與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生明顯相關(guān)，而p53基因異常以第5-8外顯子的點(diǎn)突變或小堿基的缺失最常見。DNA修復(fù)基因XPD參與由于吸煙及環(huán)境致癌因素引起DNA損傷的核酸切除修復(fù)。最近研究表明，XPD基因存在多態(tài)性，使得機(jī)體修復(fù)DNA損傷的能力下降或缺失，而使其對癌癥的易感性增加。為了研究肺癌DNA修復(fù)基因XPD遺傳多態(tài)性與p

2、53基因突變相關(guān)情況，我們研究了60例非小細(xì)胞肺癌患者p53基因突變及XPD基因751多態(tài)發(fā)生情況，并比較了p53基因突變與XPD751基因型之間的相關(guān)性。全文共分為以下二個部分：
　　第一部分用PCR–SCCP及DNA測序法研究肺癌p53基因突變
　　目的：探討p53基因突變與人類肺癌發(fā)生的關(guān)系。
　　方法：運(yùn)用PCR–SCCP結(jié)合銀染法對60例肺癌組織及同一患者正常肺組織p53基因第5、6、7和8外顯子進(jìn)行突變檢測

3、，運(yùn)用ABI、PRISM3730自動測序儀對所有陽性突變標(biāo)本進(jìn)行DNA測序分析點(diǎn)突變。
　　結(jié)果：在60例肺癌組織中檢出p53基因突變25例，突變率為41％（25/60），而正常肺組織中未檢出突變。其中15例（60%，15/25）為吸煙患者，突變率44%（15/34），不吸煙患者10例（40%，10/25），突變率38%（10/26），卡方檢驗結(jié)果x2值0.19，P0.66；男性突變率44%高于女性突變率33%，x2值0.57，P

4、0.45；年齡因素，年齡70歲患者18例，突變率53%（18/34），年齡70歲患者（27%，7/26），x2值4.10，P0.04；組織學(xué)方面，腺癌突變率45%為最高，鱗癌突變率最低38%,細(xì)支氣管肺泡癌44%，x2值0.33，P0.85，同時針對腺癌中男、女 p53基因突變情況作了一個亞組分析結(jié)果，男性患者突變率66.7%明顯高于女性20%的突變率，x2值4.79，P0.04；臨床分期中，Ⅰ期患者突變率47%，Ⅱ期21%，Ⅲ期65%

5、，Ⅳ期20%，x2值8.25，P0.04，各組間的比較陽性結(jié)果只有，Ⅱ期與Ⅲ期，x2值7.03，P0.02；淋巴結(jié)累及，淋巴結(jié)陽性患者突變率41%（16/39），陰性者43%，x2值0.22，P0.89。所有p53基因點(diǎn)突變患者中，包括9（36%，9/25）例多堿基點(diǎn)突變，16（64%，17/25）例單堿基點(diǎn)突變。吸煙患者中突變類型顛換：轉(zhuǎn)換為17：5，而相反，非吸煙患者中顛換：轉(zhuǎn)換為10：7，卡方檢驗結(jié)果x2值1.53，P0.30；男

6、性患者中突變類型顛換：轉(zhuǎn)換為23：8，而女性患者中顛換：轉(zhuǎn)換為4：4，x2值1.75，P0.22。
　　結(jié)論：p53基因突變與人類肺癌的發(fā)生具有明顯相關(guān)性，且突變發(fā)生與年齡及術(shù)后pTNM分期明顯相關(guān)，而與吸煙、組織學(xué)類型、性別、淋巴結(jié)情況無明顯相關(guān)；突變類型顛換發(fā)生與吸煙、性別因素?zé)o明顯相關(guān)。
　　第二部分 NSCLC患者DNA修復(fù)基因XPD多態(tài)性與p53基因突變的相關(guān)性
　　目的：探討60例NSCLC患者中DNA修復(fù)

7、基因XPD751位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與p53基因突變的相關(guān)性。
　　方法：以PCR–RFLP方法分析60例NSCLC患者外周血XPD基因Lys751Gln多態(tài)基因型；運(yùn)用PCR–SCCP結(jié)合銀染法對60例肺癌組織p53基因第5、6、7和8外顯子進(jìn)行突變檢測，運(yùn)用ABI、PRISM3730自動測序儀對所有陽性突變標(biāo)本進(jìn)行DNA測序。
　　結(jié)果：19例（32%，19/60）患者至少攜帶一個XPD751Gln等位基因。25例發(fā)生p5

8、3基因突變，突變率為42%（25/60），其中15例（60%，15/25）為吸煙患者，突變率44%（15/34），不吸煙患者10例（40%，10/25），突變率38%（10/26）。吸煙患者中突變類型顛換：轉(zhuǎn)換為16：5，而相反，非吸煙患者中顛換：轉(zhuǎn)換為11：7。p53基因突變患者中，10例（53%，10/19）至少攜帶1個 XPD751Gln等位基因，15例為野生基因型XPD751Lys/Lys（34%，15/41）, X2值1.37

9、，P0.27;在吸煙患者中，攜帶至少1個XPD751Gln等位基因p53突變率為54.5%（6/11）高于野生型XPD751Lys/Lys的39.1%（9/23）, X2值0.72，P0.48。25例p53基因突變患者共發(fā)生39個堿基點(diǎn)突變，其中顛換27個（69%，27/39），轉(zhuǎn)換12個（31%，12/39）。39個堿基點(diǎn)突變中，攜帶至少1個XPD751Gln等位基因的患者顛換發(fā)生明顯占優(yōu)勢，顛換：轉(zhuǎn)換為14：2，而相反野生基因型XP

10、D751Lys/Lys為顛換：轉(zhuǎn)換為13：10, X2值4.25，P0.08;吸煙患者中共發(fā)生22堿基點(diǎn)突變，攜帶至少1個XPD751Gln等位基因的患者顛換發(fā)生明顯占優(yōu)勢，顛換：轉(zhuǎn)換為10：1，不吸煙者為7：4, X2值2.76，P值0.15。發(fā)生p53顛換的吸煙女性患者中攜帶至少1個XPD751Gln等位基因的發(fā)生比例為10/11或3/4，而純合型XPD751Lys/Lys的吸煙或女性患者顛換的發(fā)生比例7/11或1/4, X2值5.

11、2，P值0.02，OR為7.29，95%CI為1.09–48.93。
　　結(jié)論：NSCLC中DNA修復(fù)基因XPD751Gln多態(tài)與p53基因突變無明顯相關(guān)；吸煙患者中，DNA修復(fù)基因XPD751Gln多態(tài)與p53基因突變之間也無明顯相關(guān)性；DNA修復(fù)基因XPD751AC多態(tài)與顛換發(fā)生無明顯相關(guān)性；吸煙患者中，DNA修復(fù)基因XPD751AC多態(tài)與顛換發(fā)生之間也無明顯相關(guān)；吸煙女性患者中 XPD751AC多態(tài)與顛換發(fā)生具有明顯相關(guān)性，