Ambra1介導(dǎo)的自噬與凋亡在結(jié)腸癌中的研究.pdf

1、目的:Ambra1是一個與自噬相關(guān)的重要基因,越來越多的研究揭示了Ambra1可以通過促進(jìn)自噬從而發(fā)揮的促生存的作用。在Ambra1在胚胎干細(xì)胞中可以調(diào)控Beclin1依賴的自噬。然而,Ambra1在與結(jié)腸癌細(xì)胞中自噬相關(guān)的信號通路中扮演何種的角色,這方面的研究仍然未見報道,在本研究當(dāng)中,我們就Ambra1相關(guān)的自噬與凋亡應(yīng)用結(jié)腸癌細(xì)胞株展開討論。
　　方法:1.使用人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620,饑餓誘導(dǎo)SW620細(xì)胞株發(fā)生自噬,通過W

2、setern blot技術(shù)檢測自噬標(biāo)志性蛋白LC3的表達(dá),并且采用透射電鏡以及免疫熒光進(jìn)一步確定結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620中自噬體的形成,同時用Western blot檢測目標(biāo)蛋白Ambra1表達(dá)的變化2.使用凋亡誘導(dǎo)劑staurosporine(十字胞堿)和etoposide(足葉乙苷)處理SW620細(xì)胞株,檢測Ambra1蛋白表達(dá)的變化;使用calpain抑制劑以及caspase抑制劑,運用Western blot的方法研究Ambra1

3、在SW620細(xì)胞株凋亡時發(fā)生降解的機制3.使用Ambra1-siRNA干擾Ambra1 RNA后觀察Ambra1對于SW620細(xì)胞株的自噬、凋亡和增殖的作用
　　結(jié)果:1.饑餓誘導(dǎo)的SW620結(jié)腸癌細(xì)胞株自噬與Ambra1蛋白的表達(dá)成正相關(guān)即自噬過程中Ambra1蛋白的表達(dá)增高。2.凋亡誘導(dǎo)過程中SW620結(jié)腸癌細(xì)胞株自噬相關(guān)蛋白Ambra1被不斷降解,caspase和calpain可能參與了Ambra1蛋白的降解。3.通過使用A

4、mbra1相應(yīng)的干擾RNA瞬時轉(zhuǎn)染SW620細(xì)胞,我們發(fā)現(xiàn)SW620結(jié)腸癌細(xì)胞株中干擾組相對于空轉(zhuǎn)組對于 staurosporine或者 etoposide誘導(dǎo)的凋亡更加的敏感,并且在干擾組SW620結(jié)腸癌細(xì)胞株中由饑餓誘導(dǎo)的自噬程度顯著的降低。
　　結(jié)論:在結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620中,腫瘤細(xì)胞通過自噬抵抗外部環(huán)境給予的壓力,Ambra1可以通過結(jié)合Beclin1正性調(diào)控自噬的同時負(fù)性調(diào)控凋亡,提示:Ambra1在結(jié)腸癌中調(diào)節(jié)自噬以