雌激素受體α66介導乳腺癌細胞對紫杉醇耐藥的研究.pdf

1、乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一。美國癌癥協(xié)會研究表明,乳腺癌已成為女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,死亡率僅次于肺癌居第二位。隨著我國經(jīng)濟的不斷發(fā)展,近些年來乳腺癌發(fā)病率已位居女性惡性腫瘤首位。如何有效提高乳腺癌綜合治療效果,降低發(fā)病率和死亡率,已成為當前乳腺癌研究重點之一。
　　 乳腺癌組織中雌激素受體(Estrogen receptor,ER)的狀態(tài)被廣泛認為是預測患者對內分泌治療反應性和預后的關鍵指標之一。雌激素受體主要有兩個

2、亞型,即Erα和Erβ。由于剪切異構體的存在,ER66尚有三個亞型,即ERα66,ERα46和ERα36,其中ERα66即為通常所說的Erα,也簡稱為ER66。大量臨床試驗和回顧性研究都表明ER66陽性的乳腺癌患者對化療的反應性不如陰性患者敏感,ER66可能影響乳腺癌患者化療的有效性。紫杉醇是乳腺癌化療最有效的藥物之一,近些年來大量的臨床試驗表明ER66可能影響乳腺癌患者對紫杉醇的敏感性。
　　 本課題研究了轉染ER66(BC-

3、ER)和轉染空質粒(BC-V)的乳腺癌細胞對紫杉醇敏感性的差異及可能機制。具體內容如下:
　　 1.乳腺癌細胞的轉染
　　 我們將pcDNA3.1-ER66和pcDNA3.1空載體轉入ER66-的Bcap37乳腺癌細胞,進行RT-PCR和Western-blot鑒定,建立穩(wěn)定轉染細胞株,即轉染ER66的BC-ER細胞和轉染空載體的BC-V細胞。
　　 2.BC-ER和BC-V乳腺癌細胞對紫杉醇敏感性差異的研究

4、r>　　 以建立的同源細胞模型(BC-ER和BC-V細胞)為基礎來研究ER66的表達對紫杉醇敏感性的影響。用MTT法和流式PI染死細胞法檢測BC-ER(轉染ER66)和BC-V(轉染空質粒)細胞對紫杉醇的敏感性。實驗結果表明在E2作用下BC-ER細胞較BC-V細胞對紫杉醇耐藥。
　　 3.BC-ER和BC-V乳腺癌細胞對紫杉醇敏感性差異的機制研究(1)細胞增殖速度在BC-ER和BC-V乳腺癌細胞對紫杉醇敏感性差異中的作用研究<

5、br>　　 化療敏感性和細胞增殖速度有一定關系,增殖慢的細胞對化療耐藥。MTT結果提示E2可以抑制BC-ER細胞的增殖活力,我們進一步檢測了BC-ER和BC-V在E2作用下細胞周期和周期蛋白D1的表達變化,結果提示,在BC-ER細胞,E2作用下G2/S期細胞減少,周期蛋白D1表達下調,提示E2作用可抑制BC-ER細胞的增殖速度。推測BC-ER細胞在E2作用下細胞增殖速度的減慢可能對紫杉醇耐藥有一定的影響。
　　 (2)細胞凋亡

6、通路在BC-ER和BC-V乳腺癌細胞對紫杉醇耐藥差異中的作用研究
　　 BC-ER和BC-V乳腺癌細胞對紫杉醇敏感性差異的研究表明Bcap37細胞表達ER66后可降低其對紫杉醇的敏感性,接下來我們檢測了ER66在紫杉醇誘導乳腺癌細胞凋亡中的可能作用。用Western-blot檢測兩種細胞在紫杉醇作用下凋亡蛋白caspase3的表達差異,結果表明在BC-ER細胞E2作用下可以抑制紫杉醇誘導的caspase3酶原活化裂解,而轉染空載

7、體的BC-V細胞沒有此變化,也就是說在BC-ER細胞ER66可以通過caspase3途徑抑制紫杉醇的促凋亡作用。在具體機制上,我們用Western-blot檢測了凋亡信號通路蛋白NF-κB/Iκ-Bα,JNK和AKT的表達及磷酸化狀態(tài)的變化。
　　 結果提示,紫杉醇作用下可以引起B(yǎng)C-ER和BC-V細胞Iκ-Bα磷酸化降解。而在轉染ER66的BC-ER細胞,E2可抑制紫杉醇誘導的Iκ-Bα磷酸化降解,在轉染空載的BC-V細胞沒有