比索洛爾對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血NO及血管MMP9、VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖怯^察比索洛爾是否對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化有防治作爾,觀察比索洛爾對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血NO及血管MMP9,VEGF表達(dá)的影響。方法:1.選取50只6周齡雄性wister大鼠,體重約180±40g,隨機(jī)分為⑴A組(空白對(duì)照組):給予普通飼料;⑵B組(模型組即動(dòng)脈粥樣硬化組):給予高脂飼料(含豬油10％,丙硫氧嘧啶0.2％,白糖7％,膽固醇2％,膽酸鈉0.5％及普通飼料80.3％),并每間隔一個(gè)月分三天腹腔注射總量為60萬(wàn)u/kg的V

2、itD注射液。⑶C組(比索洛爾干預(yù)組1):給予高脂飼料,及每天灌胃比索洛爾1.25mg/kg/只,同樣并每間隔一個(gè)月分三天腹腔注射總量為60萬(wàn)u/kg的VitD注射液。⑷D組(比索洛爾干預(yù)組2):給予高脂飼料,及每天灌胃比索洛爾2.5mg/kg/只,同樣每間隔一個(gè)月分三天腹腔注射總量為60萬(wàn)u/kg的VitD注射液。(5)E組(比索洛爾干預(yù)組3):給予高脂飼料,并每天灌胃比索洛爾5mg/kg/只,同樣每間隔一個(gè)月分三天腹腔注射總量為60

3、萬(wàn)u/kg的VitD注射液。2.于13周末先將大鼠麻醉,后抽取大鼠心腔內(nèi)血液4ml,將血液注入含0.5％枸櫞酸鈉的檢測(cè)管中,將裝有血液的檢測(cè)管放入離心機(jī)中,以2000r/min的速度離心后,取上清液測(cè)定血清NO及NO合酶。3將大鼠主動(dòng)脈從主動(dòng)脈開(kāi)口處分離至腹主動(dòng)脈分支處,并將分離出的主動(dòng)脈從主動(dòng)脈弓與胸主動(dòng)脈分界處分為兩份。將主動(dòng)脈弓段血管壁的脂肪及筋膜用鑷子分離掉,洗凈后做石蠟包埋固定,用固定好的石蠟塊切成4um厚度的薄片然后行HE染

4、色及免疫組化 MMP9及VEGF。6.統(tǒng)計(jì)方法:用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件 SPSS17.0完成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)工作,實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差( X±S)表示,若方差齊,可進(jìn)行單因素方差分析,LSD法進(jìn)行組間均數(shù)兩兩比較。結(jié)果:1.病理切片可見(jiàn): A組:動(dòng)脈血管內(nèi)膜光滑完整,各層結(jié)構(gòu)清晰,未見(jiàn)泡沫細(xì)胞;B組:表層可見(jiàn)纖維帽,表面纖維增生紊亂,管壁向管腔明顯突出,其下可見(jiàn)大量泡沫細(xì)胞形成,深層可見(jiàn)一些脂質(zhì)沉積;C組:管壁表層仍可見(jiàn)纖維帽并向官腔突出,其

5、下可見(jiàn)多量泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)和壞死物質(zhì)沉積,內(nèi)皮不完整;D組:表層纖維帽較薄,管壁向管腔突出不明顯,其下可見(jiàn)泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)。E組:與D組相比較,程度明顯減輕,可見(jiàn)內(nèi)皮稍不完整及少量泡沫細(xì)胞。2.各組血清NO含量:A組:31.656±5.158,B組:8.608±2.294, C組:10.032±2.133,D組:15.988±2.393,E組:23.314±4.274。B組與 A組相比 P<0.05,C組與 B組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P>0.0

6、5,D組和E組與B組相比,P值均小于0.05,D組和E組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05。3.各組血清NOS含量:A組:17.994±0.842,B組:10.263±1.306,C組:10.689±1.387,D組:13.464±0.921,E組:16.105±0.946。B組與 A組相比 P<0.05,C組與 B組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異, P>0.05,D組和E組與B組相比,P值均小于0.05,D組和E組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05。4.各

7、組血管VEGF的平均光密度值:A組:14.526±4.725,B組:167.699±25.745,C組:161.708±30.081, D組:100.777±19.453,E組:56.857±27.685。B組與 A組相比P<0.05,C組與B組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P>0.05,D組和E組與B組相比,P值均小于0.05,D組和E組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 P<0.05。5.各組血管MMP9的平均光密度值:A組:11.936±5.045,B組:1

8、37.577±32.548,C組:123.562±27.071,D組:83.691±20.233,E組:46.510±18.087。B組與A組相比P<0.05,C組與B組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P>0.05,D組和E組與B組相比,P值均小于0.05,D組和E組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05。結(jié)論:1.通過(guò)給予大鼠高脂飼料及定時(shí)定量給予腹腔注射VitD可成功復(fù)制大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型。2.本實(shí)驗(yàn)中可見(jiàn)大鼠血 NO及NO合酶在動(dòng)脈粥樣硬化模型組中明

9、顯降低,表明內(nèi)皮功能障礙參與了動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展。3.MMP9在動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠主動(dòng)脈組織中明顯升高,表明細(xì)胞外基質(zhì)降解與動(dòng)脈粥樣硬化及斑塊不穩(wěn)定有密切關(guān)系。4.VEGF在動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠主動(dòng)脈組織中明顯升高,提示動(dòng)脈粥樣硬化的形成與血管內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度增生有關(guān)。5.比索洛爾干預(yù)后,血NO及NO合酶明顯升高,組織內(nèi)VEGF及MMP9明顯下降,表明比索洛爾能改善粥樣硬化血管的血管內(nèi)皮功能,防治內(nèi)皮增生,減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解,進(jìn)而發(fā)揮