辛伐他汀對結(jié)腸癌細胞HT29的促凋亡作用及可能機制.pdf

1、目的：為進一步研究他汀類藥物抗腫瘤作用，探討他汀類藥物內(nèi)在的抗腫瘤機制，本實驗通過細胞實驗觀察辛伐他汀對人結(jié)腸癌細胞HT29增殖、凋亡的影響，以及辛伐他汀對凋亡相關(guān)Bcl-2、Bax分別在基因水平和蛋白表達水平的調(diào)控，闡述辛伐他汀促進人結(jié)腸癌細胞HT29凋亡的可能機制，為他汀類藥物在結(jié)腸癌的預防、治療方面應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：常規(guī)培養(yǎng)人結(jié)腸癌HT29細胞，取其對數(shù)生長期的細胞進行試驗。用不同濃度(終濃度為0、40、60、8

2、0、100μmol/L)辛伐他汀分別培養(yǎng)人結(jié)腸癌HT29細胞24、48、72h，觀察細胞的增殖情況，噻唑藍比色法(MTT)檢測辛伐他汀作用下的細胞吸光度(OD)值，并計算其生長抑制率值；流式細胞儀檢測不同濃度辛伐他汀(終濃度為0、40、60、80、100μmol/L)對HT29細胞作用48h后細胞凋亡率；RF-PCR法觀察不同濃度辛伐他汀(終濃度為0、40、60、80μmol/L)作用48h后HT29細胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax

3、mRN人水平；Westernblotting法觀察不同濃度辛伐他汀(終濃度為0、40、60、80μmol/L)作用48h后HT29細胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax蛋白表達情況。本實驗以正常培養(yǎng)的HT29細胞(辛伐他汀終濃度為0μmol/L)為陰性對照，不同濃度辛伐他汀干預后的HT29細胞為實驗組。
　　結(jié)果：噻唑藍比色法(MTT)示辛伐他汀處理后的HT29細胞吸光度(OD)值較對照組降低(P<0.05)，根據(jù)OD值計算所得抑制率

4、隨著作用濃度的增加、作用時間的延長而增高；流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)辛伐他汀對HT29細胞具有促凋亡作用，隨著辛伐他汀藥物濃度增大其凋亡率逐漸增高(P<0.05)；RT-PCR試驗檢測發(fā)現(xiàn)辛伐他汀作用HT29細胞后，隨著辛伐他汀作用濃度的增高，Bcl-2 mRNA條帶密度較陰性對照組依次降低、Bax mRNA條帶密度較陰性對照組依次增高，各實驗組與陰性對照組相比差別具有統(tǒng)計學意義，并呈現(xiàn)出濃度依賴性(P<0.05)。Western blotti

5、ng實驗發(fā)現(xiàn)辛伐他汀作用于HT29細胞后，隨著辛伐他汀作用濃度的增高，Bcl-2的蛋白表達依次降低、而Bax的蛋白表達依次增高，各實驗組與陰性對照組相比其差別具有統(tǒng)計學意義，并呈現(xiàn)濃度依賴性(P<0.05)。
　　結(jié)論：辛伐他汀可抑制體外培養(yǎng)的結(jié)腸癌細胞HT29的增殖，促進結(jié)腸癌細胞HT29的捌亡。辛伐他汀干預結(jié)腸癌HT29細胞后Bcl-2 mRNA和蛋白表達降低；Bax mRNA和蛋白表達增高。在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平下調(diào)Bcl-2的表