基因芯片在篩選食管鱗癌組織及周圍正常食管黏膜組織差異表達基因中的應(yīng)用.pdf

1、食管癌是我國常見的惡性腫瘤之一,其中河南省林州市食管癌的發(fā)病率高達150／10萬。食管癌進展迅速,侵襲性強且常伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,易復(fù)發(fā),預(yù)后差。常規(guī)手術(shù)治療及放、化療效果均不能令人滿意。所以,尋求食管癌治療的新方法為當(dāng)前研究熱點。
　　 基因芯片亦稱DNA微陣列或寡核苷酸微陣列,是20世紀(jì)90年代后發(fā)展的一項DNA分析新技術(shù),它是以微陣列方式將基因片段或大量寡核菅酸有序地、高密度地排列在某種固相載體上檢測特定基因表達的一種技術(shù),如

2、:玻片、硅片和尼龍膜(一般為1cm2左右)。其檢測的基本原理是分子雜交,堿基互補。具體過程是:在固相支持物上排列大量的探針分子,然后利用熒光標(biāo)記序列或樣品(DNA或cDNA)同芯片上的探針分子進行雜交,接著將固相支持物上沒有發(fā)生互補結(jié)合反應(yīng)的片段除去,利用激光共聚焦顯微鏡進行掃描,再借助計算機軟件對熒光信號強、弱的分析處理,最后推測出樣品中相關(guān)基因的大量的定量信息。
　　 目前,國內(nèi)外利用基因芯片技術(shù)篩選各類腫瘤組織如:卵巢癌、

3、胃癌等的差異表達基因已經(jīng)取得一定成績,食管癌方面也有少量報道。本實驗通過基因芯片技術(shù)對食管鱗癌的基因表達情況進行分析,通過與正常食管黏膜組織基因表達情況對比,找到異常表達的基因,以尋找與食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的基因,為食管鱗癌的早期診斷、預(yù)防和治療提供高特異性、高敏感性的分子標(biāo)記和靶基因。
　　 方法:提取河南省腫瘤醫(yī)院5例食管鱗癌患者和周圍正常食管鱗狀上皮組織的mRNA,然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,并用單標(biāo)法將Cy3-dUTP標(biāo)記于

4、食管鱗癌組織及其周圍正常組織后制成探針,在適當(dāng)?shù)臈l件下與基因芯片進行雜交,經(jīng)特殊掃描儀掃描后,進行計算機軟件分析,最后得到篩選結(jié)果。另取30例標(biāo)本利用RT-PCR對篩選結(jié)果進行驗證。
　　 結(jié)果:依Ratio實驗組(癌組織)／對照組(正常食管組織)>4.0或<0.25的數(shù)據(jù)項,在5例新鮮標(biāo)本的芯片雜交檢測中共篩選出1113條基因發(fā)生差異表達,其中上調(diào)的有464條,下調(diào)的有649條,將這些基因按GO(gene ontology)分