紅麻素抗類風濕性關(guān)節(jié)炎作用及誘導免疫耐受機制研究.pdf

1、目的：研究紅活麻單體雙香豆素類化合物紅麻素抗類風濕性關(guān)節(jié)炎作用；觀察紅麻素在Ⅱ型膠原誘導的關(guān)節(jié)炎模型（CIA）中的抗自身免疫性關(guān)節(jié)炎的作用；分別用Elisa法測血清細胞因子IFN-γ、TGF-β、IL-2與IL-10的變化，流式細胞術(shù)檢測樹突狀細胞DC表型及轉(zhuǎn)錄因子T-bet表達的變化，檢測藥物對CD25+CD4+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞分化影響等方法來探討紅麻素抗類風濕性關(guān)節(jié)炎的作用機制；通過觀察紅麻素對體內(nèi)臟器的影響，體外對肝癌He

2、pG2細胞增殖的作用來探討紅麻素細胞毒性。
　　 方法：（1）在BALB/c 小鼠體內(nèi)建立Ⅱ型膠原所致關(guān)節(jié)炎模型，將小鼠分為紅麻素高、中、低劑量組，MTX 陽性對照組，CIA模型組，空白對照組。治療組在造模后第21天按60mg/kg、40mg/kg、20mg/kg的劑量，每日灌胃給藥，連續(xù)3周，利用體重變化、關(guān)節(jié)腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、脾臟指數(shù)等指標以及組織病理學檢查觀察紅麻素對關(guān)節(jié)炎發(fā)病和關(guān)節(jié)損傷的影響，驗證紅麻素治療RA的作用。

3、
　　 （2）利用Elisa 法檢測紅麻素對小鼠血清中細胞因子IFN-γ、IL-2、TGF-β和IL-10分泌的影響;通過流式細胞術(shù)檢測紅麻素對骨髓來源樹突狀細胞（DC）的表型、轉(zhuǎn)錄因子T-bet表達水平變化以及細胞因子IL-12p70分泌的影響；檢測給藥后小鼠體內(nèi)CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞分化的變化，探討紅麻素治療類風濕型關(guān)節(jié)炎的作用機理。
　　 （3）觀察給藥后小鼠臟器的變化，利用MTT 法檢測其對H

4、epG2 肝癌腫瘤細胞生長抑制的影響。
　　 結(jié)果：紅麻素治療組表現(xiàn)出對Ⅱ型膠原誘導的類風濕性關(guān)節(jié)炎的抑制作用,關(guān)節(jié)炎評分和關(guān)節(jié)腫脹度與CIA模型組相比較輕，且呈劑量依賴趨勢停藥一周后效果仍然明顯。病理分析顯示經(jīng)過紅麻素治療的小鼠，關(guān)節(jié)炎性浸潤程度比CIA模型組輕，這種保護的狀態(tài)伴隨著血清中的IFN-γ、IL-2分泌水平的降低和IL-10、TGF-β分泌水平的升高。經(jīng)過紅麻素處理的DC表面低表達MHCⅡ和CD86 共刺激分子，I

5、L-12p70的分泌減少，并且DC中的轉(zhuǎn)錄因子T-bet表達受到抑制。紅麻素治療組小鼠體內(nèi)CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞的分化水平增高。測量動物各內(nèi)臟指數(shù)顯示給藥組與正常組臟器指數(shù)相近，沒有明顯差異，體外肝癌細胞增殖實驗紅麻素對肝癌細胞沒有抑制作用。
　　 結(jié)論：（1）實驗結(jié)果表明紅活麻單體紅麻素具有抗小鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎作用，可以減輕關(guān)節(jié)炎小鼠的發(fā)病及延緩病情，且給藥后預后效果良好。
　　 （2）紅麻素可能從