益氣化痰祛瘀膠囊對(duì)肺纖維化大鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察益氣化痰祛瘀膠囊對(duì)博萊霉素致大鼠肺纖維化(Pulmonaryfibrosis,PF)的相關(guān)細(xì)胞因子系統(tǒng)一纖維四項(xiàng)[血清中Ⅲ型膠原(Ⅲtype of collagen),Ⅳ型膠原(Ⅳ type of collagen)及層粘連蛋白(Withadhesive whites)和透明質(zhì)酸(Transluceilt quality acid)],腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor-a)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(trans

2、forminggrowth factor-betaβ1)的影響,進(jìn)一步探討益氣化痰祛瘀膠囊治療本病的作用機(jī)制,為該藥廣泛應(yīng)用臨床、申請(qǐng)專利提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:60只健康Wistar大鼠,體重240±20g,隨機(jī)將其分為六組:正常組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、益氣化痰祛瘀膠囊高劑量組、益氣化痰祛瘀膠囊中劑量組、益氣化痰祛瘀膠囊低劑量組,每組各10只。用10％水合氯醛腹腔注射麻醉,將大鼠仰臥位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,固定頭和四肢,切開(kāi)頸部

3、皮膚,暴露氣管,正常組一次性氣管滴注等量生理鹽水,其余五組均采用經(jīng)氣管滴注博來(lái)霉素溶液建立肺纖維化大鼠模型,之后每日每只大鼠用青霉素8萬(wàn)單位肌肉注射預(yù)防感染,共計(jì)3天。給藥過(guò)程中觀察動(dòng)物的一般狀況:動(dòng)物活動(dòng)、體型、皮毛、攝食、糞便、精神狀態(tài)等。造模48h后,益氣化痰祛瘀膠囊高、中、低劑量組(5.625g/kg、2.812g/kg、1.40125/kg)灌胃給藥,每日一次,相當(dāng)于人臨床日用劑量體重比例的20、10和5倍;陽(yáng)性對(duì)照組用醋酸潑

4、尼松混懸液(0.25mg/kg)灌胃給藥,每日一次,相當(dāng)于人臨床日用計(jì)量體重比例的7.5倍。正常組與模型組生理鹽水灌胃,每日一次,劑量均為10ml/kg·bw,上述六組給藥周期均為28天,次日晨起殺檢,并收集樣本,觀察對(duì)肺纖維化大鼠造模后的肺臟、胸腺和脾臟的影響,比較各組大鼠肺臟系數(shù)的變化情況;觀察各組動(dòng)物雙肺外觀差別,取右肺中葉置于10%甲醛中固定,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)4 u m厚石蠟切片,行HE染色,測(cè)定肺組織羥脯氨酸的含量,光鏡下觀

5、察大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)變化;化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清學(xué)中的纖維四項(xiàng),即Ⅲ型膠原(PCⅢ),Ⅳ型膠原(Ⅳ)、層粘連蛋白(LN)以及透明質(zhì)酸(HA)的含量;采用ABC-ELISA法檢測(cè)大鼠血清細(xì)胞因子TGF-β1和TNF-a;
　　 結(jié)果：
　　 (1)一般狀況觀察:大鼠60只,在實(shí)驗(yàn)期間均無(wú)死亡,正常組活潑好動(dòng),強(qiáng)壯肥碩,皮毛光亮,精神狀態(tài)良好;模型組表現(xiàn)出不同程度的咳喘(大約持續(xù)到7天左右),瞇眼,呆滯,精神差,造模型后第3天

6、有5只出現(xiàn)拱背蜷縮,皮毛晦暗,無(wú)光澤;陽(yáng)性對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前幾天表現(xiàn)與模型組相似,治療1周后有所好轉(zhuǎn),但食欲一般;中藥組開(kāi)始表現(xiàn)與模型組相似,治療后明顯好轉(zhuǎn),精神食欲較好。從體重上觀察,模型組體重?zé)o明顯增加,陽(yáng)性對(duì)照組、益氣化痰祛瘀膠囊低、中、高劑量組體重均有明顯增加。與陽(yáng)性對(duì)照組比較,高劑量組體重明顯增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (2)肺臟系數(shù)的比較:益氣化痰祛瘀膠囊5.625g/kg、2.8125g/kg、1.401

7、25/kg高、中、低三個(gè)劑量組造模給藥后,高、中、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組肺臟系數(shù)與模型組相比明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組肺臟系數(shù)無(wú)明顯變化,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (3)纖維四項(xiàng)比較:與模型組比較,陽(yáng)性對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組Ⅲ型膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)、層粘連蛋白(LN)、透明質(zhì)酸酶(HA)均明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與陽(yáng)性對(duì)照

8、組比較,益氣化痰祛瘀膠囊高、中劑量組血清層粘連蛋白(LN)和透明質(zhì)酸酶(HA)有所降低,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05).
　　 (4)病理結(jié)果顯示:模型組大鼠肺泡壁明顯增厚,肺彌漫性淤血出血灶性纖維化,肺泡上皮細(xì)胞變性,間質(zhì)大面積纖維化,淋巴細(xì)胞含鐵血黃素細(xì)胞浸潤(rùn),大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。陽(yáng)性對(duì)照組肺泡壁增厚,大面積纖維化,間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),上皮脫落變性、壞死,淋巴細(xì)胞含鐵血黃素。高劑量組大鼠肺泡壁增厚(灶性),間質(zhì)輕度纖維化,淋巴

9、細(xì)胞浸潤(rùn),含鐵血黃素。中劑量組大鼠肺泡壁增厚,部分大鼠輕度間質(zhì)纖維化。低劑量組大鼠肺泡壁增厚,有的破裂,大面積纖維化,淋巴細(xì)胞含鐵血黃色素細(xì)胞浸潤(rùn)。益氣化痰祛瘀膠囊各治療組與模型組相比,肺組織病理改變均有不同程度改善,肺泡炎的程度差異具有顯著性(P＜0.05),由重到輕排序?yàn)槟Ｐ徒M,低劑量組,陽(yáng)性對(duì)照組,中劑量組,高劑量組,正常組。
　　 (5)TNF-a、TGF-β1的比較:模型組大鼠血清中TGF-β1的含量顯著高于正常組(P

10、＜0.01),益氣化痰祛瘀膠囊高、中、低劑量組TGF-β1的含量顯著低于模型組(P＜0.05).模型組、益氣化痰祛瘀膠囊低劑量組大鼠血清中TNF-a水平顯著高于正常組(P＜0.05);而益氣化痰祛瘀膠囊高、中劑量組大鼠血清中TNF-a水平與正常組差別不顯著(P＞0.05);益氣化痰祛瘀膠囊中劑量組血清中TNF-a水平低于陽(yáng)性對(duì)照組,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 (6)肺組織羥脯氨酸(HYP)的比較:與正常組比較:模型

11、組、陽(yáng)性對(duì)照組羥脯氨酸值明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型組對(duì)照,正常組以及低、中、高劑量組羥脯氨酸值均有明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與陽(yáng)性對(duì)照組比較,正常組、高劑量組羥脯氨酸值有明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 通過(guò)該課題的研究,我們可以得出以下結(jié)論:
　　 1.模型組大鼠肺組織HE切片病理形態(tài)變化與文獻(xiàn)報(bào)道一致,說(shuō)明肺纖維化模型復(fù)制成功;
　　 2.

12、益氣化痰祛瘀膠囊對(duì)肺纖維化病理變化有明顯的改善作用,這一作用可能是通過(guò)以下途徑而實(shí)現(xiàn)的:通過(guò)抑制調(diào)節(jié)肺組織中氧化/抗氧化系統(tǒng)的平衡,減少細(xì)胞炎性介質(zhì)的分泌,減輕氧自由基對(duì)肺組織結(jié)構(gòu)的氧化損傷程度;抑制肺組織膠原蛋白的合成以及纖維四項(xiàng)的生成,從而減輕博萊霉素對(duì)大鼠的肺組織結(jié)構(gòu)的破壞,減輕肺纖維化實(shí)變的程度;綜上所述,益氣化痰祛瘀膠囊對(duì)肺纖維化的發(fā)生和發(fā)展能夠起到有效的防治效果,對(duì)博萊霉素致大鼠肺纖維化有明顯的保護(hù)作用。
　　 3.