厚殼貽貝多糖MPs分離純化、理化性質(zhì)與立體結(jié)構(gòu)測(cè)定及生物學(xué)活性研究.pdf

1、目的：分離純化得到不同純度厚殼貽貝多糖(Mytiluscoruscuspolysaccharides，MPs)，并測(cè)定其理化性質(zhì)，包括糖含量測(cè)定、純度鑒定、分子量測(cè)定、單糖組分分析、糖苷鍵類(lèi)型證明、一維和二維結(jié)構(gòu)測(cè)定；純化得到純品進(jìn)行生物學(xué)活性探索。 方法：1.厚殼貽貝多糖MPs的分離純化用組織勻漿后熱水抽提，Sevag法除蛋白，乙醇沉淀，再經(jīng)DEAE-cellulose52、SephacrylS-200HR柱層析和高效液相色譜

2、(HPLC)，分離純化得到貽貝多糖純品MPs。 2.厚殼貽貝多糖MPs的理化性質(zhì)與結(jié)構(gòu)測(cè)定制備得到多糖樣品行全波段的最大吸收波長(zhǎng)光譜掃描和硫酸—苯酚比色法測(cè)定糖含量；經(jīng)紫外光譜掃描分析、染料結(jié)合比色法、HPLC、聚丙烯酰胺電泳鑒定其純度，凝膠過(guò)濾法測(cè)量分子量，紅外光譜掃描分析多糖特征吸收譜和糖苷鍵類(lèi)型，再經(jīng)薄層色譜(TLC)、氣相色譜(GC)進(jìn)行單糖組分分析，NMR測(cè)定多糖純品的一維和二維結(jié)構(gòu)。 3.厚殼貽貝多糖MPs的

3、生物學(xué)活性研究厚殼貽貝多糖純品MPs-B1溶液，分別行MTT比色法測(cè)定大鼠睪丸支持細(xì)胞的存活率以了解其促進(jìn)睪丸支持細(xì)胞增殖作用，和流式細(xì)胞儀測(cè)培養(yǎng)基內(nèi)含MPs-B1的K562細(xì)胞凋亡比例以研究其抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。 結(jié)果：熱水抽提、Sevag法除蛋白和乙醇沉淀制備得到貽貝多糖粗品(CrudeMytiluscoruscuspolysaccharides，CMPs)，呈淡黃色粉末狀，吸水性強(qiáng)，水溶解度佳。CMPs經(jīng)DEAE-ce

4、llulose52、SephacrylS-200HR柱層析得到半純品多糖MPs-A、MPs-B、MPs-C，再經(jīng)HPLC后分別分離并純化得到各個(gè)不同組分：MPs-A1/A2/B1/B2/B3/C1/C2/C3，均呈白色粉末狀，水溶性好。以硫酸—苯酚比色法、染料結(jié)合比色法、紫外光譜掃描法測(cè)定表明各個(gè)組分幾乎不含蛋白，凝膠過(guò)濾法(HPLC)提示除MPs-A2外其余組分均為均一組分，聚丙烯酰胺電泳層析則顯示七個(gè)組分均為均一組分。根據(jù)洗脫時(shí)間對(duì)

5、相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，MPs-A1/A2/B1/B2/B3/C1/C2/C3的相對(duì)分子量分別為3.8×104、4.139×103、3,51×103、5.2×104、4.168×103、4.22×103、6.85×104、5.50×104Da。紅外光譜分析顯示除MPs-A1的多糖紅外吸收特征光譜不是很明顯外其余三個(gè)組分均為結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的雜多糖，MPs-B1為α-D-吡喃糖，MPs-C2和MPs-C3均為B型呋喃糖。從氣相色譜結(jié)果可知

6、MPs-A1僅含有葡萄糖；MPs-B1含有半乳糖和葡萄糖，二者摩爾比為39.07：60.93；MPs-C2含有半乳糖和葡萄糖，二者摩爾比為57.30：42.70。其中MPs-B1純度較高，1HNMR表明為α-型吡喃己糖，其二維結(jié)構(gòu)正在進(jìn)一步解析中。MPs-B1能提高原代培養(yǎng)大鼠睪丸支持細(xì)胞的存活率，增加K562細(xì)胞的凋亡率。 結(jié)論：經(jīng)工藝改進(jìn)后獲得的MPs與同類(lèi)和前期研究所報(bào)道的貽貝多糖在理化性質(zhì)、含糖量、單糖組分上均有顯著區(qū)別