mir-126抑制結腸癌侵襲轉移的功能及其機制研究.pdf

1、目的:研究miR-126在體內(nèi)是否具有抑制結腸癌細胞增殖、侵襲轉移的作用及miR-126對CXCR4及RhoA信號通路是否具有調控作用。
　　方法:1.利用慢病毒載體構建穩(wěn)定過表達miR-126的結腸癌細胞系HCT116及穩(wěn)定沉默miR-126的結腸癌細胞系SW480。
　　2.利用穩(wěn)定過表達miR-126的結腸癌細胞系HCT116及穩(wěn)定沉默miR-126的結腸癌細胞系SW480進行裸鼠皮下、尾靜脈成瘤實驗。
　　3.

2、realtime PCR檢測穩(wěn)定過表達及沉默miR-126的結腸癌細胞系中CXCR4及RhoA信號通路重要分子的表達。
　　4.利用原位雜交技術檢測人結腸癌組織芯片癌及癌旁正常黏膜中miR-126的表達，免疫組化技術檢測人結腸癌組織芯片癌及癌旁正常黏膜中CXCR4及RhoA信號通路重要分子的表達，分析各分子的表達與結腸癌臨床病理特征之間的關系，并進行miR-126與CXCR4及RhoA通路重要分子表達的相關性分析及生存分析。

3、>　　結果:1.miR-126在HCT116過表達實驗組中的表達較對照組上調5.08倍(P＜0.05)，在SW480沉默實驗組中的表達為其對照組的0.128倍(P＜0.05)，穩(wěn)定過表達miR-126細胞系HCT116、穩(wěn)定沉默miR-126細胞系SW480構建成功。
　　2.裸鼠皮下成瘤實驗結果表明過表達miR-126實驗組皮下移植瘤瘤體平均體積明顯小于其對照組瘤體體積(P＜0.05)，穩(wěn)定沉默miR-126實驗組皮下移植瘤瘤體

4、平均體積明顯大于其對照組瘤體體積(P＜0.05)。尾靜脈成瘤組中穩(wěn)定過表達miR-126實驗組肺部轉移灶的平均數(shù)目、面積均明顯小于其對照組(P＜0.05)，穩(wěn)定沉默miR-126實驗組肺部轉移灶的平均數(shù)目、面積均明顯大于其對照組(P＜0.05)。
　　3.realtime PCR結果表明在穩(wěn)定過表達miR-126結腸癌細胞系HCT116實驗組中CXCR4、RhoGEF的表達較其對照組明顯下調，ARHGAP5的表達較其對照組明顯上調

5、(P＜0.05);在穩(wěn)定沉默miR-126細胞系SW480實驗組中CXCR4、RhoGEF的表達較其對照組明顯上調，ARHGAP5的表達較其對照組明顯下調(P＜0.05)。
　　4.原位雜交結果顯示miR-126在人結腸癌組織中的表達較癌旁正常黏膜表達明顯下調(P＜0.05)，且miR-126的表達與結腸癌臨床分期、淋巴結轉移明顯相關(P＜0.05);免疫組化結果示CXCR4及RhoA信號通路重要分子RhoA、RhoGEF、Rho

6、GAP、ROCK、PI3K、PAK1、PKN1在人結腸癌組織中的表達較癌旁正常黏膜組織均明顯上調(P＜0.05)，且CXCR4、RhoA、RhoGEF、ROCK、PI3K的表達與結腸癌臨床分期、淋巴結轉移明顯相關(P＜0.05)，RhoGAP、PAK1、PKN1的表達與各項臨床病理特征均無關(P＞0.05)。相關分析結果顯示miR-126的表達與CXCR4、RhoA、RhoGEF、ROCK的表達明顯負相關(P＜0.05)，與RhoGAP

7、、PAK1、PKN1、PI3K的表達無明顯相關關系(P＞0.05);CXCR4的表達與RhoA、RhoGEF、ROCK的表達明顯正相關(P＜0.05)，與RhoGAP、PAK1、PKN1、PI3K的表達無明顯相關關系(P＞0.05)。生存分析結果顯示miR-126陽性表達組結腸癌患者生存率明顯高于陰性表達組，CXCR4、RhoA、RhoGEF、ROCK陽性表達組患者生存率明顯低于陰性表達組患者(P＜0.05)，RhoGAP、PAK1、P