用于軟骨組織工程膠原及其復(fù)合支架的制備及性質(zhì)的研究.pdf

1、目前，用于軟骨組織工程支架的生物降解材料分為天然高分子材料和合成高分子材料。合成材料主要有聚乙交酯PGA、聚丙交酯PLA以及二者的共聚物PLGA等，其具有良好的力學(xué)性能和降解速度可調(diào)控性，然而，它們是疏水性材料，生物相容性較差；此外其降解產(chǎn)物呈酸性，使植入材料的周圍組織pH值降低，易引起嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。 因此，本研究選擇生物相容性良好的天然材料膠原(本室自制的牛腱Ⅰ型膠原)制備軟骨組織工程支架，通過改變制備工藝條件，優(yōu)化膠原多孔

2、支架的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)；同時(shí)，制備3-羥基丁酸與3-羥基己酸共聚酯(PHBHHx)支架，并采用膠原和肝素與其復(fù)合，使其兼具有天然和合成材料的優(yōu)點(diǎn)。 1．兔軟骨細(xì)胞分離、鑒定、體外培養(yǎng)。本研究提取新生48h的新生兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，結(jié)果證明：新生兔關(guān)節(jié)軟骨經(jīng)膠原酶消化4h可以獲得大量高活性的軟骨細(xì)胞，在體外培養(yǎng)，可以維持軟骨細(xì)胞表型6代以上。 2．膠原多孔支架的制備和支架—細(xì)胞復(fù)合物的構(gòu)建。應(yīng)用冷凍干燥技術(shù)，通過改變制備工藝：不同

3、濃度的膠原溶脹液、不同預(yù)凍溫度預(yù)凍、不同交聯(lián)劑交聯(lián)，制備膠原多孔支架。通過考察支架的形貌結(jié)構(gòu)、理化性能和細(xì)胞相容性。結(jié)果表明：采用不同制備工藝，可以制備出不同孔徑結(jié)構(gòu)的膠原多孔支架，進(jìn)而影響膠原多孔支架的力學(xué)性能、降解性能和細(xì)胞相容性等。在25-265um孔隙尺寸范圍內(nèi)，孔徑越大越有利于軟骨細(xì)胞的黏附和增殖。 3．將第6代軟骨細(xì)胞種植在優(yōu)選的膠原多孔支架(0.6％膠原溶脹液、-50℃預(yù)凍、EDC交聯(lián))上，構(gòu)建支架-細(xì)胞復(fù)合物，并

4、對其進(jìn)行電鏡觀察、組織學(xué)觀察和分子生物學(xué)檢測。結(jié)果顯示：軟骨細(xì)胞在此膠原多孔支架上增殖旺盛，保持軟骨分化表型，而且隨培養(yǎng)時(shí)間的延長，Ⅱ型膠原表達(dá)逐漸增強(qiáng)，說明此膠原多孔支架有利于軟骨細(xì)胞的增殖以及表型的維持，可以作為軟骨細(xì)胞的良好載體，在體外構(gòu)建組織工程軟骨。 4．PHBHHx/膠原-肝素支架制備和表征。應(yīng)用溶液澆鑄/鹽析法制備PHBHHx支架，用膠原和肝素與PHBHHx支架復(fù)合，經(jīng)冷凍干燥和EDC交聯(lián)，制備PHBHHx/膠原及