肝細胞生長因子受體c-MET在大鼠胰腺發(fā)育中的表達.pdf

1、運用高密度寡核苷酸芯片建立大鼠胰腺發(fā)育不同階段(胚胎(E)12.5，E15.5，E18.5，新生和成年)的基因表達譜，經(jīng)過生物信息學數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)許多與胰腺功能相關(guān)的基因在E18.5相對高表達，提示胚胎發(fā)育后期胰腺功能正趨于完善和成熟，這個時期是形成典型胰腺結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵階段，而胰腺結(jié)構(gòu)是胰腺發(fā)揮正常生物學功能的基礎(chǔ)。本研究從基因表達譜中篩選出c-met原癌基因在E18.5特異性高表達，旨在初步探討該基因及其表達產(chǎn)物c-MET蛋白在胰腺發(fā)育不

2、同階段的表達及細胞組織學定位。為進一步揭示c-MET對胰腺發(fā)育的調(diào)控作用提供試驗室數(shù)據(jù)。 運用RT-PCR技術(shù)對大鼠胰腺發(fā)育基因芯片中c-met基因檢測結(jié)果進行驗證(芯片所設(shè)計探針位于各條基因3’端非編碼區(qū))，同時針對c-met基因5’端編碼區(qū)設(shè)計引物，用RT-PCR技術(shù)檢測c-met基因在胰腺發(fā)育過程中的表達。兩次RT-PCR檢測結(jié)果顯示：(1)引物設(shè)計與基因芯片探針設(shè)計所用c-met基因區(qū)域一致時，RT-PCR表達趨勢與基因

3、芯片檢測結(jié)果相同；(2)引物設(shè)計與基因芯片探針設(shè)計所用c-met基因區(qū)域不一致時：在胰腺胚胎發(fā)育時期c-met的表達趨勢反向，而在新生后至成年時期表達趨勢趨于一致。分別用蛋白免疫印跡及免疫組織化學技術(shù)檢測c-MET蛋白在大鼠胰腺發(fā)育不同階段(胚胎(E)12.5、E15.5、E18.5、新生后1天、生后14天、生后21天和成年)的表達及細胞組織學定位。結(jié)果顯示：c-MET在大鼠胰腺發(fā)育E18.5天開始出現(xiàn)表達，新生后升高，生后21天最高，

4、表達量較E18.5天升高近50倍，成年表達量下降。同時，c-MET在胰腺發(fā)育不同階段表達不同的蛋白亞型：胚胎及成年期分別表現(xiàn)兩個不同的亞型(190KD，170KD)；生后14、21天兩個亞型都存在。c-MET蛋白在胰腺的細胞組織學定位隨著胰腺發(fā)育階段的變化而變化：胚胎期主要定位在胰腺導(dǎo)管上皮細胞；生后14天除胰腺導(dǎo)管上皮細胞外，胰島也有少量散在陽性細胞；生后21天胰島中c-MET陽性細胞的表達較胰腺導(dǎo)管上皮細胞多；成年c-MET又定位在

5、胰腺導(dǎo)管上皮細胞及少量胰島細胞。基于以上實驗結(jié)果，c-met原癌基因mRNA的不同表達趨勢預(yù)示該基因存在不同轉(zhuǎn)錄本，在胰腺發(fā)育不同階段的出現(xiàn)c-MET蛋白不同亞型的表達，也與該蛋白已報道的兩種不同亞型相符。胚胎和成年胰腺分別表達190KD和170KD的兩種亞型，此時蛋白定位于胰腺導(dǎo)管上皮細胞。c-MET在新生胰腺顯著、特異性高表達，定位于胰島細胞和導(dǎo)管上皮細胞；生后胰腺結(jié)構(gòu)重塑階段，c-MET兩種蛋白亞型的顯著、特異性高表達提示：c-M