神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在相關免疫性神經(jīng)疾病發(fā)病中作用機制的研究以及IVIg對此類疾病的保護作用及評價.pdf

1、格林巴利綜合征(GBS)是目前世界上由自身免疫性神經(jīng)肌肉疾病導致軟癱首要的病因。神經(jīng)節(jié)苷脂，一種攜帶唾液酸基的鞘糖脂，在脊椎動物的神經(jīng)系統(tǒng)中含量豐富。拮抗神經(jīng)節(jié)苷脂的抗體與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關目前，有充足的證據(jù)證明抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體與某些GBS的亞型有重要的關聯(lián)。但是，仍有很多與神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在此類疾病中作用有關的重要議題有待證明。諸如，有關神經(jīng)節(jié)苷脂抗體的目標抗原本質問題，提供進一步的與補體作用有關的實驗證據(jù)等。充分理解上述有關神經(jīng)節(jié)苷

2、脂抗體誘導損傷的分子和細胞水平的作用機制可以幫助我們更有效地開發(fā)相關的免疫療法。為達到這一目的，一個很重要的步驟就是建立一種可模擬此類損傷的體外模型。這是由于目前我們還缺乏一種穩(wěn)定而顯著的小鼠GBS動物模型。因此，我們建立了兩種相關的體外模型：(1)抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導的神經(jīng)細胞毒模型，(2)一種由神經(jīng)節(jié)苷脂抗體導致了運動神經(jīng)損傷的脊髓培養(yǎng)模型。 另外，正是由于目前缺乏一種行之有效的GBS被動免疫模型，因此有關神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在G

3、BS中所起作用還有爭議。我們最近培育出一些具有相對高親和力的單克隆抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體。我們嘗試了通過腹腔移植分泌這些抗體的雜交瘤的方法，將抗體被動轉移至小鼠體內。而后，我們通過此模型研究了諸多在神經(jīng)病變產生過程中可能有關聯(lián)的因素。 雖然IVIg已通過臨床研究被證明為一種有效的治療急慢性免疫介導的神經(jīng)病變(包括格林巴利綜合征)的一線療法。但是，目前還不曾系統(tǒng)地檢驗過不同品種，或同一品種但不同批次的IVIg，是否具有相同或相似的治療效

4、果。為了驗證這一議題，我們利用了一種體外神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導的細胞毒模型，分析和比較了8種品牌的IVIg，以及來自其中兩種品牌的不同批次IVIg在此模型中的保護作用。 第一部分：神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導的神經(jīng)細胞細胞毒模型，及IVIg保護作用的相關研究 目的：探討兩類與神經(jīng)節(jié)苷脂抗體所導致的神經(jīng)損傷相關的基本問題：(1)有些神經(jīng)節(jié)苷脂抗體與糖蛋白有交叉反應，因此此類抗體的目標抗原尚待進一步闡明。(2)雖然，目前病理學研究已提示補

5、體激活在GBS發(fā)病中的作用，但依舊缺乏這方面的實驗學依據(jù)。 方法：一種建立在NG108-15和NG-CR-72細胞上的由不同抗神經(jīng)節(jié)苷脂單克隆抗體或含有抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體的GBS患者血清誘導的神經(jīng)細胞細胞毒模型被在此研究中使用。另外，人靜脈免疫球蛋白(HumanIntravenous Immunoglobulin，IVIg)也被用于此模型來檢驗其可能存在的保護作用。 結果：(1)無論是抗神經(jīng)節(jié)苷脂單克隆抗體，還是含有神經(jīng)節(jié)

6、苷脂抗體的GBS壽人血清，均可通過細胞表面相應的特異神經(jīng)節(jié)苷脂而導致神經(jīng)細胞溶解；(2)這類細胞溶解還是補體依賴性的。此外，在本實驗模型中，GD1a的膜聚集區(qū)較GM1的聚集區(qū)對特異性神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導的損傷具有更高的敏感性。(3)IVIg可有效地抑制此模型中由神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導的細胞毒作用。IVIg在此模型中的保護作用機制可歸結于：抗個體基因型抗體作用，以及其對補體激活的抑制作用。 結論：此實驗模型因此可被應用于鑒別由免疫介導的

7、神經(jīng)疾病患者體內的致病神經(jīng)節(jié)苷酯抗體，同時還可被用來篩選新的或實驗性的用于防治神經(jīng)節(jié)苷酯抗體誘導神經(jīng)損傷的治療方法。 第二部分：神經(jīng)節(jié)苷脂抗體分泌型雜交瘤導致的小鼠神經(jīng)病變 目的：目前由于缺乏被動免疫動物模型，對于神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在GBS發(fā)病中所起的作用仍存在爭議。因此，本研究具體探討了可影響神經(jīng)節(jié)苷脂抗體對神經(jīng)損傷的一些因素，并希望進而對以后成功開發(fā)出被動免疫動物模型起到拋磚引玉的作用。 方法：我們在以往的研究中

8、培養(yǎng)出多種單克隆神經(jīng)節(jié)苷脂抗體。某些此類抗體被通過腹腔神經(jīng)節(jié)苷脂抗體分泌型雜交瘤移植術，或系統(tǒng)性全身施藥法而被動轉移到小鼠體內。實驗結束后，上述動物接受了系統(tǒng)地病理學檢驗，以觀察其神經(jīng)損傷狀況。同時，比較了兩組間血-神經(jīng)屏障通透性的差異。 結果：大約一半接受腹腔雜交瘤移植術的小鼠出現(xiàn)了影響到部分神經(jīng)纖維的，散在的軸索病變。與之形成對比的是，被動系統(tǒng)性地接受抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體的動物，盡管血循環(huán)中抗體滴度很高，但并未發(fā)生神經(jīng)纖維退變．

9、通過對血-神經(jīng)屏障通透性的研究發(fā)現(xiàn)，接受腹腔雜交瘤移植術的動物有著較高的血．神經(jīng)屏障通透性。 結論：我們的實驗結果表明神經(jīng)病變的形成除了需要循環(huán)中的致病抗體外，其他諸如，抗體的可達性及神經(jīng)纖維對抗體介導損傷的耐受性等因素均可發(fā)揮作用。 第三部分：一種具有高親和力單克隆抗體導致的體外運動神經(jīng)退行性病變 目的：評估神經(jīng)節(jié)苷脂抗體對運動神經(jīng)損傷的作用。 方法：近期我們培養(yǎng)出兩種含有高親和性的抗GDla的單克隆抗

10、體，這兩種抗體對大鼠脊髓體外培養(yǎng)中運動神經(jīng)的損傷被在此研究中得以評估。 結果：一種具有補體激活能力的抗GDla 單克隆抗體不僅導致脊髓體外培養(yǎng)中運動神經(jīng)元數(shù)目的明顯下降，并引起運動神經(jīng)纖維Wallerian變性。與此同時，抗體亞型匹配的對照抗體及拮抗GDla的非補體激活性抗體均不能造成明顯的運動神經(jīng)病變。 結論：本研究證實此體外脊髓培養(yǎng)模型對研究運動神經(jīng)元及神經(jīng)纖維的免疫性損傷是非常有意義的?？股窠?jīng)節(jié)苷脂抗體對運動神經(jīng)體

11、外損傷的發(fā)現(xiàn)有力地支持了神經(jīng)節(jié)苷脂抗體在GBS運動軸索亞型發(fā)病過程中起到重要作用的這一理念。 第四部分：多種IVIg 在一種體外免疫神經(jīng)疾病模型中的評估 目的：分析和比較不同品牌及不同批號的靜脈免疫球蛋白IVIg的保護作用。 方法：我們利用了一種免疫神經(jīng)疾病的細胞模型，由神經(jīng)節(jié)苷脂抗體誘導的神經(jīng)細胞(NG108-15)細胞毒模型，分析比較了八種經(jīng)FDA批準的可在美國使用的不同品牌，以及其中兩種品牌不同批號的IVI