633nm低能量紅光刺激活性氧增加對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響研究.pdf

1、目的：觀察紅光照射人角質(zhì)形成細(xì)胞株（HaCaT）后，細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）濃度的變化對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響。
　　方法：建立人角質(zhì)形成細(xì)胞體外培養(yǎng)模型，分別用0.082J/cm2（10S）、0.164J/cm2（20S）、0.245J/cm2（30S）、0.491J/cm2（60S）、1.472J/cm2（180S）、2.453J/cm2（300S）、4.91 J/cm2（600S）、9.81 J/cm2（1200S）8個(gè)不同能量密

2、度波長(zhǎng)為633nm的紅光照射人角質(zhì)形成細(xì)胞株（HaCaT），對(duì)照組不照光，DCFH-DA（活性氧檢測(cè)試劑盒）孵育1小時(shí)后用酶標(biāo)儀分別于孵育后0h、0.5h、1h、2h測(cè)定熒光值，反映細(xì)胞內(nèi)ROS的濃度變化；用相同的照射條件照射人角質(zhì)形成細(xì)胞株，每8小時(shí)照射1次，照射6次48小時(shí)后 CCK-8（細(xì)胞增殖試劑）孵育4h，酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光值測(cè)定，反映細(xì)胞增殖情況，根據(jù)細(xì)胞內(nèi)由 DCFH-DA探針孵育后檢測(cè)的熒光結(jié)果，設(shè)計(jì)對(duì)照組、0.082J/c

3、m2（10S）組、0.491 J/cm2（60S）組、2.453J/cm2（300S）組、9.81 J/cm2（1200S）組、陽(yáng)性探針檢測(cè)組6個(gè)組用紅色線粒體示蹤劑Mito-Tracker染色線粒體，同時(shí)每個(gè)組細(xì)胞內(nèi)孵育活性氧探針，在共聚焦顯微鏡下觀察ROS的來(lái)源和線粒體的關(guān)系。
　　結(jié)果： DCFH-DA孵育1小時(shí)后0h，0.5h，1h，2h四個(gè)時(shí)相點(diǎn)測(cè)定熒光值，能量密度在4.91J/cm2及以下實(shí)驗(yàn)組，熒光值均有不同程度的增

4、高，其中2.453 J/cm2能量密度組，1h時(shí)相點(diǎn)熒光值升高最明顯，和對(duì)照組相比，具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，能量密度在4.91J/cm2以上的實(shí)驗(yàn)組，熒光值升高呈下降趨勢(shì)，和對(duì)照組相比，沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CCK-8孵育4小時(shí)后測(cè)定熒光值，4.91J/cm2以下實(shí)驗(yàn)組熒光值增加明顯，其中2.453 J/cm2能量密度組最明顯，和對(duì)照組相比具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，能量密度在4.91J/cm2以上的實(shí)驗(yàn)組，熒光值降低，和對(duì)照組相比，沒有明顯的