脂肪間充質干細胞向髓核樣細胞誘導分化的實驗研究.pdf

1、目的：定向誘導大鼠脂肪間充質干細胞分化為髓核樣細胞，為椎間盤退變性疾病的細胞移植治療奠定生物學基礎。
　　 方法：①200g 雄性SD大鼠斷頸處死后，取腹股溝脂肪墊處脂肪，0.1[％]膠原酶消化，體外接種培養(yǎng)，同時采用極限稀釋法純化細胞。②利用流式細胞技術對細胞表面標記進行鑒定。③第三代細胞消化計數(shù)后，用1.2[％]海藻酸鈉溶液懸浮，調整細胞密度至1×106/ml，滴入3.5[％]CaCl2溶液形成微球，加入含TGF-beta1

2、的誘導培養(yǎng)基，低氧條件下進行微球聯(lián)合培養(yǎng)。④七天后，取部分微球進行Alcian Blue染色并收集微球內細胞提取RNA，進行RT-PCR檢測。
　　 結果：①體外培養(yǎng)的脂肪間充質干細胞主要呈梭形和多角形，核大、核仁明顯，平行排列生長或呈漩渦狀生長。②流式細胞儀檢測顯示Sca-1、CD44的陽性率分別為95.2[％]、99.7[％]，CD45、CD11b的陽性率分別為0.4[％]、1.5[％]。③微球聯(lián)合培養(yǎng)7天后，Alcian