黃芩苷、槲皮素對LPS致小鼠蛻膜細胞損傷的保護作用.pdf

1、分類號：$8572密級：公玨單位代碼：10086學號：2QQ塑旦2黃芩苷、槲皮素對LPS致小鼠蛻膜細胞損傷的保護作用ProtectiveEffectsofBaicalinandQuercetinonDecidualCellsofLP’SInducedAbortionMice學位申請人：指導教師：學科專業(yè)：學位類別：授予單位：答辯日期：木二云唇字五巨昱鐘秀會教授臨床獸醫(yī)學農(nóng)學碩士河北農(nóng)業(yè)大學二。一二年五月二十七日摘要本試驗旨在研究黃芩苷、

2、槲皮素對LPS致蛻膜細胞損傷的保護作用。本文通過三部分實驗來探討黃芩苷、槲皮素對蛻膜細胞的保護作用及其相關(guān)機制。一、通過體外細胞培養(yǎng)直觀的觀察兩種藥物的保護作用。首先對小鼠子宮蛻膜細胞的培養(yǎng)方法進行了改進，通過植塊培養(yǎng)與復合酶消化的傳統(tǒng)方法比較證實了植塊培養(yǎng)法的優(yōu)點，為下一步試驗進行奠定了基礎(chǔ)；在確定LPS對蛻膜細胞損傷作用濃度時，我們選用了以下LPS的濃度l、10、50、100、500、1000ng／ml，通過觀察損傷結(jié)果，100ng

3、／mlLPS可導致50％細胞損傷故作為損傷模型濃度確定下來；黃芩苷中劑量4lag／mlLPS、槲皮素中劑量25umol／LLPS加入細胞中與空白組和模型組對比，觀察細胞的存活率，結(jié)果顯示加藥保護細胞存活率均比模型組高。其中槲皮素的效果較黃芩苷的明顯。二、通過體內(nèi)給藥造模及口服灌胃給予黃芩苷及槲皮素的方法來進行其保胎藥效研究。孕6天小鼠40只隨機分為8組，每組5只，第一組為空白組，不做任何處理，第二組為模型組(孕6天尾靜脈注射5ug／ml

4、LPSO1ml／109)，第三組、第四組、第五組為黃芩苷、高中、低治療組(第6天造模，第7、8天各組灌胃黃芩苷O1ml／109，濃度分別為25mg／ml、125mg／ml、025mg／m1)，第六組、第七組、第八組為槲皮素高、中、低治療組(第6天造模，第7、8天各組灌胃槲皮素O1ml／109，濃度分別為25mg／ml、125mg／ml、025mg／m1)，以上各組孕9天剖殺，眼球取血測量血清中TNFQ及孕酮的含量；稱量子宮凈重，數(shù)每組吸

5、收胎兒個數(shù)及著床總數(shù)，計算吸收率；HE染色觀察子宮蛻膜的病理變化。結(jié)果顯示，LPS可致孕鼠的吸收率為30％；黃芩苷、槲皮素均可減少胚胎的吸收率并增加因胚胎吸收造成的重量減輕、并能修復受損的蛻膜組織；黃芩苷、槲皮素高劑量組可顯著降低由LPS刺激單核細胞引起的炎癥因子TNF—a表達的增高(P001)；孕酮含量各組差異不顯著。三、免疫組化檢測蛻膜細胞中凋亡蛋白Caspase一3的表達，我們試圖從基因水平闡明自然流產(chǎn)與細胞異常凋亡及基因家族的關(guān)

6、系，為探討自然流產(chǎn)的機制和中藥保胎的藥理作用提供新認識。通過SABC免疫組化及AEC顯色的方法檢測空白組、模型組、黃芩苷中高治療組、槲皮素中高治療組蛻膜組織中Caspase一3的表達，計算陽性細胞數(shù)和統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示，LPS顯著增加Caspase3(PO01)的表達，黃芩苷、槲皮素均可有效降低蛻膜組織中Caspase。3的表達(P001)。槲皮素對Caspase3有雙向調(diào)節(jié)作用，高劑量應用會使Caspase一3的表達增加。結(jié)論：黃芩苷