雄激素剝奪對雄性大鼠膀胱結構和功能的影響及其機制研究.pdf

1、第一部分：雄激素剝奪對雄性大鼠膀胱組織結構影響及其機制的研究
　　 研究目的
　　 探討雄激素剝奪對雄性大鼠膀胱組織結構的影響，同時探討其可能的機制。
　　 實驗動物和方法
　　 本研究將實驗雄性大鼠(Sprague-Dawley雄性大鼠)共36只，隨機分成四組：(1)雙側睪丸切除組(Emasculatedratsgroup，EMR組，即去勢組)：對實驗大鼠施行雙側睪丸切除，以研究雄激素剝奪后對雄性大鼠膀

2、胱組織結構的影響；(2)睪丸切除+雄激素替代治療組(Emasculatedratstreatedwithtestosteronegroup，EMR+T組，即去勢+激素組)：實驗大鼠去勢后隨即給予雄激素肌肉注射補充治療，以進一步探討雄激素剝奪對實驗大鼠膀胱組織結構的影響；(3)睪丸切除+TGF-β1中和抗體治療組(Emasculatedratstreatedwithanti-TGF-β1neutralizingantibodygroup，

3、EMR+A組，即去勢+抗體組)：實驗大鼠去勢后隨即給予TGF-β1(轉化生長因子-β1)中和抗體腹腔注射治療，以探討雄激素剝奪對膀胱組織結構影響的分子機制；(4)假手術組(Shamsurgeryratsgroup，Sham組，即對照組)：本組實驗大鼠僅做假手術處理，作為本實驗的對照。
　　 2個月后，采用ELISA法檢測四組大鼠的血清總睪酮的水平；處死后取膀胱組織，以Masson'sTrichrome染色法顯示膀胱組織結構，Im

4、ageProPlus6.0軟件定量分析了膀胱組織纖維化的程度；電鏡觀察膀胱超微結構的改變；采用RealtimePCR檢測纖維化相關基因的表達水平。
　　 結果
　　 雙側睪丸切除術后，EMR組大鼠血清內(nèi)雄激素水平顯著降低，達到去勢水平(0.002±0.0005ng/ml)。Masson'sTrichrome染色顯示膀胱內(nèi)大量平滑肌排列紊亂，大量纖維組織沉積于平滑肌間隙。隨后，我們利用ImageProPlus6.0軟件定量

5、分析了膀胱組織纖維化的程度，結果顯示EMR大鼠膀胱組織中膠原纖維面積/膀胱平滑肌面積比率較Sham組顯著升高。電鏡結果表明，與Sham組大鼠比較，EMR組大鼠膀胱平滑肌排列紊亂，細胞間間隙增寬，胞膜有高電子密度沉積物，脫落細胞胞漿成分散在細胞間隙，平滑肌間隙以纖維組織增生為主。RealtimePCR定量檢測pro-collagenImRNA的表達，結果顯示EMR組大鼠pro-collagenImRNA的水平較Sham組大鼠顯著升高。

6、r>　　 雄激素補充治療2個月后，去勢大鼠血清總睪酮水平(1.432±0.303ng/ml)，明顯高于Sham組大鼠，說明雄激素補充治療能有效維持血清睪酮水平。Masson'sTrichrome染色亦顯示，膀胱內(nèi)平滑肌結構和排列有序，肌束間少量纖維結締組織，纖維組織面積/平滑肌面積比率較EMR組大鼠顯著降低，與Sham組大鼠無顯著差異；電鏡檢查結果顯示EMR+T組大鼠膀胱平滑肌排列整齊，細胞間隙有少量膠原纖維，細胞間以中間連接為主。E

7、MR+T組大鼠中pro-collagenImRNA的水平顯著低于EMR組大鼠，與Sham組大鼠無顯著性差異。
　　 為進一步探討分子機制，我們檢測了EMR組大鼠膀胱內(nèi)TGF-β1mRNA的表達水平，結果顯示該組大鼠膀胱組織內(nèi)TGF-β1mRNA的水平較Sham組大鼠顯著升高。而雄激素補充治療后，EMR+T組大鼠膀胱內(nèi)TGF-β1mRNA的水平較EMR組大鼠顯著降低，與Sham組無顯著性差異。組織病理學和基因檢測的結果均表明，去勢

8、大鼠經(jīng)TGF-β1中和抗體治療后(EMR+A組)，膀胱平滑肌和纖維化的程度較EMR組大鼠顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論
　　 本研究顯示雄性大鼠去勢后，隨著血清總睪酮水平的降低，其膀胱表現(xiàn)出平滑肌超微結構的改變和平滑肌損傷，從而導致膀胱纖維化的發(fā)生，補充雄激素治療能有效地阻止雄激素剝奪誘導的膀胱平滑肌結構損傷和膀胱纖維化的發(fā)生。
　　 雄激素剝奪通過激活TGF-β信號通路導致膀胱纖維化的發(fā)生，利用TGF

9、-β中和抗體封閉該信號通路的活性能有效地阻止該病理過程，提示TGF-β可成為今后治療膀胱纖維化的重要靶點。
　　 第二部分：雄激素剝奪對大鼠膀胱功能的影響及機制研究
　　 研究目的
　　 探討雄激素剝奪對雄性大鼠膀胱功能的影響，同時闡明其分子機制。
　　 實驗動物和方法
　　 本研究將實驗大鼠隨機分成四組(參見第一部分)，于術后2個月，對四組大鼠進行尿流動力學檢查，檢測各組大鼠膀胱最大容量和膀胱順

10、應性，評估各組大鼠的膀胱功能。
　　 結果
　　 EMR組大鼠膀胱最大容量0.51±0.16ml，較Sham組大鼠顯著減少(1.25±0.20ml)。此外，EMR組大鼠膀胱順應性(0.015±0.005ml/cmH2O)較Sham組大鼠顯著降低(0.029±0.007ml/cmH2O)。EMR+T組大鼠膀胱最大容量(1.38±0.23ml)較EMR組大鼠有顯著提高，與Sham組大鼠相比無統(tǒng)計學差異；膀胱順應性(0.029

11、±0.008ml/cmH2O)較EMR組(0.015±0.005ml/cmH2O)大鼠也顯著升高。EMR+A組在給予TGF-β中和抗體治療后，EMR+A組大鼠膀胱最大容量(0.96±0.27ml)較EMR組大鼠(0.51±0.16ml)顯著增加，膀胱順應性(0.023±0.004ml/cmH2O)亦顯著升高。
　　 結論
　　 本研究表明雄激素剝奪后，可導致實驗大鼠膀胱最大容量和順應性的降低，而雄激素補充治療能有效預防雄