TRAIL聯(lián)合白藜蘆醇對人乳腺癌細胞MDA-MB-231凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 乳腺癌是危害我國婦女健康最主要的惡性腫瘤之一。主要治療方法包括手術、化療、放療、內(nèi)分泌治療等,但各有局限性,特別是放、化療對正常細胞具有毒性作用。因此,尋找一種有效殺傷乳腺癌細胞而毒副作用小的新方法是當前亟待解決的課題。腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TNF-related apoptosis-inducingligand,TRAIL)是與細胞死亡密切相關的腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,T

2、NF)超家族成員,能與死亡受體(death receptor,DR)DR4和DR5結(jié)合,特異性誘導腫瘤細胞凋亡,對正常細胞的毒性作用卻很小,因而成為應用前景廣泛的抗腫瘤制劑。白藜蘆醇是一種多酚類天然化合物,葡萄皮和紅酒中含量尤為豐富,不但具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抑制血小板聚集、保護心血管、抗炎、抗氧化等多種生物學活性和藥理作用,而且具有顯著的抑制腫瘤的作用。本研究將TRAIL與白藜蘆醇聯(lián)合,觀察對人乳腺癌細胞系MDA-MB-231增殖及凋亡的

3、影響及機制,為探索治療乳腺癌的新方法提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 分別將不同濃度的TRAIL及白藜蘆醇單獨或聯(lián)合作用于體外細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)的人乳腺癌細胞系MDA-MB-231。應用MTT法及軟瓊脂集落形成實驗檢測藥物對腫瘤細胞增殖的抑制。DAPI染色法檢測細胞凋亡的形態(tài)學改變。流式細胞術檢測細胞凋亡率。流式細胞術檢測細胞表面TRAIL受體DR4和DR5蛋白表達的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、TRAIL

4、聯(lián)合白藜蘆醇協(xié)同抑制人乳腺癌MDA-MB-231細胞的生長:
　　 25、50、100、200μmol/L白藜蘆醇作用12h,對MDA-MB-231細胞增殖的抑制率分別為24.22％±1.66％、30.79％±1.60％、45.72％±1.25％和53.31％±1.94％；50、100、200ng/ml TRAIL作用12h,細胞增殖抑制率為13.69％±3.24％、45.99％±1.37％和61.29％±3.41％；與對照組比

5、較,均有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。50ng/ml TRAIL分別與50、100μmol/L白藜蘆醇聯(lián)合應用后,增殖抑制率分別增至62.43％±2.07％和87.32％±1.44％,與單獨應用相應濃度的TRAIL及白藜蘆醇比較,差異顯著(P<0.01)。聯(lián)合組中,100μmol/L白藜蘆醇組與較50μmol/L白藜蘆醇組差異顯著(P<0.01)。
　　 軟瓊脂集落形成實驗中,對照組集落形成率為7.17％±0.49％；50ng/m

6、l TRAIL組集落形成率為5.95％±0.05％；50、100μmol/L白藜蘆醇組集落形成率為4.55％±0.08％和3.75％±0.09％；與對照組比較,均有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。50ng/mlTRAIL與50、100μmol/L白藜蘆醇聯(lián)合應用,集落形成率分別為2.49％±0.08％和1.38％±0.07％,與單獨應用相應濃度的TRAIL和白藜蘆醇比較,差異顯著(P<0.01)。聯(lián)合組中,100μmol/L白藜蘆醇組較50

7、μmol/L白藜蘆醇組差異顯著(P<0.01)。
　　 2、TRAIL聯(lián)合白藜蘆醇協(xié)同誘導人乳腺癌MDA-MB-231細胞的凋亡:
　　 經(jīng)DAPI染色,對照組細胞胞核完整,呈橢圓形,胞核內(nèi)染色質(zhì)均勻分布；TRAIL和白藜蘆醇單獨處理后,部分胞核染色質(zhì)凝聚、邊集；TRAIL與白藜蘆醇聯(lián)合作用后,多數(shù)胞核皺縮,染色質(zhì)凝聚、邊集,熒光強度明顯增加,并出現(xiàn)胞核碎裂等晚期凋亡的典型形態(tài)學改變。
　　 50、100、200

8、μmol/L白藜蘆醇處理后細胞凋亡率分別為28.80％±1.34％、38.78％±1.19％和58.96％±1.26％:50、100、200ng/ml TRAIL處理后,細胞凋亡率分別為15.94％±0.34％、42.62％±0.99％和76.30％±2.80％；與對照組(凋亡率為3.53％±0.25％)比較,均有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。50ng/ml TRAIL與50、100μmol/L白藜蘆醇聯(lián)合應用后,凋亡率分別增加至53.5

9、9％±1.44％和73.72％±1.96％,與單獨應用相應濃度的TRAIL及白藜蘆醇比較,差異顯著(P<0.01)。聯(lián)合組中,100μmol/L白藜蘆醇組較50μmol/L白藜蘆醇組差異顯著(P<0.01)。
　　 3、白藜蘆醇上調(diào)DR4、DR5在細胞膜表面的表達:
　　 對照組細胞表面表達DR4、DR5,熒光指數(shù)(FI)分別1.52±0.04和1.61±0.13。50、100、200μmol/L白藜蘆醇作用后,DR4的

10、FI值分別為1.80±0.07、2.11±0.14和2.59±=0.16,與對照組比較差異顯著(P<0.01),組間比較差異顯著(P<0.01)；DR5的FI值分別為2.16±0.08、2.92±0.25和3.90±0.06,與對照組比較差異顯著(P<0.01),組間比較差異顯著(P<0.01)。而50、100、200ng/ml TRAIL組DR4及DR5的FI值較相應的對照組均沒有差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：