利用孕婦血漿游離胎兒DNA行胎兒產前診斷的研究.pdf

1、1997年，Lo等利用普通聚合酶鏈反應(PCR)技術在孕男胎的孕婦血漿中檢測到Y染色體性別決定基因(sex-determiningregionYgene，SRY)的特異性序列，確定了孕婦血漿中存在游離胎兒DNA(fetalDNA，fDNA)。此后進行了一系列利用fDNA進行性連鎖遺傳性疾病、RhD血型、妊娠并發(fā)癥和21三體綜合征等產前診斷的研究，其中RhD血型的產前診斷是歐洲首個臨床開展的以DNA為基礎的無創(chuàng)傷性產前診斷常規(guī)項目。目前，

2、fDNA已經成為無創(chuàng)傷性產前遺傳病基因診斷的重要物質來源，為無創(chuàng)傷性產前診斷開辟了新的途徑。 妊娠過程中，孕婦免疫系統接觸胎兒血細胞抗原(紅細胞、血小板)，胎兒血細胞可刺激孕母產生相應的抗體，引起新生兒溶血病(haemoliticdiseaseofthenewborn，HDN)和新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜(neonatalalloimmuethrombocytopenicpurpura，NAITP)等嚴重并發(fā)癥，產前獲取胎

3、兒遺傳物質進行基因診斷是行之有效的預防方法。本研究利用孕婦血漿中的fDNA進行了產前胎兒紅細胞RhEe抗原和人類血小板抗原(humanplateletantigen，HPA)的基因診斷，具有一定的創(chuàng)新性和臨床意義。 在第一部分實驗中，以胎兒SRY基因為靶序列，建立了改良的酚/氯仿法從孕婦血漿中提取DNA，采用巢式PCR方法進行擴增，擴增產物經測序鑒定。與隨訪結果相比，30例孕婦的診斷準確性達93.3﹪，可應用于無創(chuàng)傷性產前性連鎖

4、遺傳性疾病的診斷。 第二部分實驗的目的是利用孕婦血漿fDNA鑒定胎兒紅細胞RhEe血型的基因型。首先通過普通PCR擴增SRY基因以確認fDNA的存在，然后采用PCR-序列特異性引物(PCR-SSP)方法擴增12例孕婦血漿中fDNA，以檢測胎兒RhEe血型抗原的基因表型，并對產前孕婦外周血和產后嬰兒外周血進行RhEe血清學分型，回顧性評價胎兒基因分型結果的準確性。結果證實本研究建立的無創(chuàng)性產前診斷胎兒RhEe血型抗原的基因型方法是

5、可行的，當母親RhEe表型為純合子時，對血漿中胎兒RhEe行基因分型具有臨床意義。 在第三部分實驗中，建立了HPA-1～6、Gov系統的同步基因分型技術，以了解中國人群中HPA的基因分布情況。共設計合成21對序列特異性引物，探索最佳退火溫度，使HPA-1～6和Gov系統等位基因在同一條件下進行同步擴增，擴增產物在同一凝膠中進行同步電泳。此方法進行HPA基因分型準確率可以達到100﹪，中國人群中Gov(HPA-15)抗原系統在臨床

6、上的意義較大。 第四部分實驗中，在第一、二、三部分實驗研究的基礎上，首次對孕婦血漿fDNA鑒定胎兒Gov基因型進行初步研究。從孕婦血漿中提取DNA后，對胎兒Gov基因進行PCR-SSP基因分型，并對產前孕婦外周血和產后嬰兒外周血進行Gov基因PCR-SSP基因分型，回顧性評價胎兒基因分型結果的準確性。結果證實所建立的無創(chuàng)性產前診斷胎兒Gov基因型的方法是可行的，當母親Gov基因表型為純合子時，血漿中胎兒Gov基因分型具有臨床意義