NIH3T3細胞中PTPα過表達產(chǎn)生的蛋白質(zhì)差異表達的初步研究.pdf

1、在對人類有嚴重危害的疾病中，惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展最為受人關(guān)注，如何能有效抑制，殺傷腫瘤細胞，關(guān)鍵在于了解腫瘤發(fā)生的機制和尋找合適的治療靶點，這是治療腫瘤的一項重要的基礎(chǔ)工作。蛋白酪氨酸磷酸酶α(PTPα)是一種典型的受體型蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶，它可以催化蛋白分子中特定位點的磷酸化酪氨酸殘基脫磷酸，以級聯(lián)反應方式與其它蛋白磷酸酶在細胞內(nèi)構(gòu)成調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，與蛋白酪氨酸激酶(PTK)的作用相反，共同調(diào)節(jié)細胞信號轉(zhuǎn)導，在細胞生長、分化、引導有絲分裂、T

2、細胞活化等生理過程中起著重要的作用，尤其在控制細胞磷酸化酪氨酸水平上，蛋白酪氨酸磷酸酶起著非常特異性的積極作用，甚至占據(jù)了主導地位。本文對NIH3T3細胞中PTPα過表達產(chǎn)生的蛋白質(zhì)差異表達進行了研究。主要內(nèi)容如下： ⑴合成PTPα對應的cDNA引物，通過PCR實驗，驗證這株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PTPα誘導表達質(zhì)粒的NIH3T3細胞，PTPα基因在DNA水平上是否具有明顯差異，驗證之前導入的質(zhì)粒是否丟失；通過RT-PCR實驗，驗證其在DOX

3、調(diào)控下，PTPα在RNA表達水平上是否具有明顯差異；制備PTPα特異性抗體，通過WESTERN-BLOT實驗，驗證其在DOX調(diào)控下，PTPα在蛋白質(zhì)表達水平上是否具有明顯差異。 ⑵獲取并純化NIH3T3細胞總蛋白，BCA法進行蛋白定量并進行二維電泳，分析二維電泳差異點，對差異蛋白點進行質(zhì)譜分析 ⑶合成差異蛋白對應cDNA的引物，通過RT-PCR和REALTIME-PCR實驗，驗證差異蛋白在相應的RNA表達水平上是否具有明