MMP-2及MMP-9在缺血再灌注大鼠腦中的表達及意義.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文MMP2及MMP9在缺血再灌注大鼠腦中的表達及意義姓名：周進申請學位級別：碩士專業(yè)：神經病學指導教師：張朝東2002.4.1分離ICA的頸外分支翼腭動脈(PPA)，穿線沿其起點結扎，ECA近端備線，用動脈夾暫時阻斷CCA及ICA，輕輕向下牽拉ECA殘端在ECA剪一小口，將制備好的直徑02mm，頭端05nun的尼龍插入ECA，扎緊備線，放開動脈夾，輕輕推進尼龍線，經CCA分叉處通過ICA人顱至大腦前動脈(ACA)，

2、斷右側大腦中動脈(MCA)所有血液來源，尼龍線插入深度距分叉為185405mm，縫合皮膚，外留1cm長尼龍線頭。缺血時間為90分鐘。再灌注時輕輕提拉所留線頭，至到有阻力時提示及尼龍線尖端已至頸外動脈殘端。如動物已清醒，需再次麻醉后再灌注。假手術除不插尼龍線外其余步驟同上。三、免疫組染色：取相鄰切片分別進行MMP一9兔多抗及MMP一2染色。具體步驟：1用二甲苯及乙醇處理標本脫石臘23％過氧化氫孵育5分鐘，消除內源性過氧化物酶活性3蒸餾水沖

3、洗，001MPBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。4封閉用10％正常羊血清工作液室溫孵育10分鐘。5滴加兔抗鼠MMP一9IgG及MMP一21[gG一抗工作液(1：50稀釋)室溫孵育過夜。6001MPBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。7滴加生物素標記的第二抗體，37。C孵育30分鐘。8001MPBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。9滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素37。C孵育30分鐘。10001MPBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。11滴加新鮮配制

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