茶樹β-1，3-葡聚糖酶基因的克隆及原核表達(dá)分析.pdf

1、 本論文中，首次從木本植物茶樹中克隆出β-1，3-葡聚糖酶基因(Glu)的全長(zhǎng)序列，并在原核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，鑒定表達(dá)蛋白的活性，為開展茶樹抗真菌病害的基因工程研究及運(yùn)用生物技術(shù)培養(yǎng)茶樹良種打下基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：1.根據(jù)已知茶樹Glu 3’-端的部分序列設(shè)計(jì)特異引物，采用5'-RACE技術(shù)獲得了5’-端核酸序列片段1005bp，經(jīng)過測(cè)序，在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索分析表明，克隆所得堿基序列和所推導(dǎo)的氨基酸序列

2、與已報(bào)道的其他植物的cDNA相應(yīng)序列有很高的一致性，推測(cè)該特異產(chǎn)物為茶樹Glu的片段。2.根據(jù)已知Glu 3’-端部分序列和克隆得到的5’-端序列設(shè)計(jì)特異引物，通過采用高保真酶體系做PCR反應(yīng)，得到全長(zhǎng)序列2002bp，開放閱讀框?yàn)?488bp，編碼495個(gè)氨基酸。在GenBank和Swiss-Port數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索分析表明，該序列所推導(dǎo)的氨基酸序列與已報(bào)道的其他植物Glu的cDNA相應(yīng)序列有30～70﹪的一致性，推測(cè)該全長(zhǎng)片段為茶樹Gl