鴨源腸球菌的致病性和致病機(jī)制的研究.pdf

1、以臨床分離的4株鴨源腸球菌（鄭1株、鄭2株、鄭3株、北京株）和1株糞腸球菌（參考株）為研究對(duì)象，根據(jù)其部分生物學(xué)特性將各菌株鑒定到種；人工感染雛鴨及小白鼠，比較各菌株的致病力強(qiáng)弱，探討腸球菌的致病特點(diǎn)和致病機(jī)制；提取各菌株的細(xì)胞壁蛋白，制備抗原、抗體，并采用SDS-PAGE和Western-blot技術(shù)比較各菌株細(xì)胞壁蛋白的異同。借以對(duì)分離菌株進(jìn)行更細(xì)致的表型分析，探討腸球菌的胞壁蛋白的差異性與其致病力強(qiáng)弱之間是否存在著關(guān)聯(lián)，從而為該病

2、的致病機(jī)制和免疫機(jī)制的更深入研究提供理論依據(jù)。 1．對(duì)4株鴨源腸球菌臨床分離株和1株糞腸球菌參考菌株的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生理生化特性、對(duì)藥物的敏感性等生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究，旨在將這4株臨床分離菌株準(zhǔn)確鑒定到種，為以后的致病性試驗(yàn)和不同菌株細(xì)胞壁蛋白的比較分析奠定基礎(chǔ)。結(jié)果5個(gè)被檢菌株在光學(xué)顯微鏡下呈球形、革蘭氏陽(yáng)性染色和鏈狀排列方式，以及能在10℃、45℃和6.5％NaCl肉湯等條件下生長(zhǎng)的特性均符合腸球菌屬的特征，各菌株

3、生化反應(yīng)特性與糞腸球菌特性基本一致，因此將這5個(gè)菌株均鑒定為糞腸球菌。藥敏試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們均對(duì)青霉素、萬(wàn)古霉素和慶大霉素敏感而對(duì)四環(huán)素耐藥。 2．復(fù)制雛鴨感染腸球菌病理模型，觀察各組鴨感染后的主要臨床癥狀和病理變化，計(jì)算各組感染鴨的發(fā)病率、死亡率和細(xì)菌分離率；同時(shí)測(cè)定各菌株對(duì)小白鼠的半數(shù)致死量，觀察感染小鼠的主要臨床癥狀和病理變化。旨在比較不同菌株的致病力強(qiáng)弱，找出高致病力菌株，揭示腸球菌的致病特點(diǎn)和致病機(jī)制。結(jié)果顯示5個(gè)菌株對(duì)

4、雛鴨和小白鼠均有致病性，且以北京株致病力最強(qiáng)，其感染雛鴨的發(fā)病率、死亡率和細(xì)菌分離率均明顯高于另外4株；北京組感染鴨早于其它組出現(xiàn)臨床癥狀且癥狀最明顯，病理變化也較其它組嚴(yán)重；北京株對(duì)小白鼠的LD<,50>明顯低于其它4株，對(duì)感染小鼠的病理?yè)p傷也較其它組嚴(yán)重。感染鴨主要剖檢變化為心包積液，心外膜和氣囊表面附著有纖維素性炎性滲出物，肝臟腫大、淤血、出血和壞死，以及脾臟腫大等；鏡下主要發(fā)現(xiàn)病鴨心肌出血，肝臟炎性細(xì)胞浸潤(rùn)以及脾臟淋巴細(xì)胞減少等

5、等。 3．將各菌株的18h THB培養(yǎng)物離心，沉淀用溶菌酶處理后經(jīng)超聲波粉碎菌體細(xì)胞，再將裂解物離心，取沉淀得細(xì)胞壁制備物。該細(xì)胞壁制備物再經(jīng)70％飽和硫酸銨純化即得細(xì)胞壁蛋白。采用SDS-PAGE技術(shù)分離各菌株的細(xì)胞壁蛋白，比較各菌株蛋白圖譜的異同。采用半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)將SDS-PAGE分離的各抗原蛋白帶轉(zhuǎn)印到FVDF膜上，與常規(guī)方法免疫家兔制備的抗北京株胞壁蛋白的抗血清進(jìn)行Western-blot分析，檢測(cè)各抗原蛋白的免疫學(xué)活性