重組纖維連接蛋白氨基端肝素結合域多肽的制備和在大鼠體內的藥代動力學研究.pdf

1、纖維連接蛋白(Fibronectin，FN)是一種多功能的糖蛋白，能與肝素、膠原、纖維蛋白以及整合素家族的細胞表面受體結合，參與細胞的黏附、遷移、止血、抗感染以及維持血管的完整性等多種作用。FN分子中有多個功能結構域，其中的兩個肝素結合域，分別位于其N端和C端。已有的研究表明FN的肝素結合域多肽具有以下多種功能：增強血管內皮生長因子的活性，促進血管的生成[1]；增強細胞結合域介導的細胞黏附與增殖，抑制肝癌的生長和轉移[2-4]；通過抑制

2、p53和c-Myc基因調節(jié)細胞的凋亡，同時參與調節(jié)造血干細胞的增殖與分化，并能與淋巴細胞表面的CD44結合，參與免疫的調節(jié)[5-7]；具有刺激組織纖溶酶原激活和激活纖溶酶的活性[8]。本課題組的鄒起練博士、吳勇博士等前期成功構建了FN N端肝素結合域多肽的酵母表達載體，并成功轉化GS115酵母菌株，用酵母表達出了FN N端肝素結合域多肽(FNNHBDPP)，且通過動物實驗表明FNNHBDPP具有治療小鼠敗血癥和彌漫性血管內凝血(DCI)

3、的作用。實驗研究還發(fā)現FNNHBDPP可以抑制黑色素瘤及肝癌的侵襲和轉移，可見FNNHBDPP在治療敗血癥、DIC和腫瘤方面具有巨大的潛力。但是FNNHBDPP在動物體內的代謝模式、組織分布、排泄方式等都還不清楚，有待進一步深入研究。 本實驗在前期研究的基礎上，用發(fā)酵罐自動表達和純化出FNNHBDPP，并利用125I-FNNHBDPP作為示蹤劑，采用同位素示蹤-高效液相色譜法(HPLC-RAD)研究了FNNHBDPP在大鼠體內的

4、藥代動力學過程，考察了該藥在大鼠體內的代謝、排泄情況和在小鼠體內的組織分布情況，為新藥臨床前藥效和藥理學實驗提供了重要的藥動學信息。實驗結果表明：1采用全自動發(fā)酵罐表達的FNNHBDPP，表達量高，純化以后經過電泳純度和色譜純鑒定，FNNHBDPP純度可達98％以上；2靜注FNNHBDPP后在大鼠體內的藥代動力學模型符合二房室模型，大鼠高、中、低劑量的體內平均分布半衰期T1/2α分別為：6.28±0.29min、6.23±0.33min

5、、5.55±0.34min，平均消除半衰期T1/2β分別為：94.37±4.49min、89.49±4.04min、82.22±2.86min，AUC與劑量的線性相關性為99.3％。144h內約有74％的代謝物從尿排出，同時約有6.3％的代謝物從糞便中排出，72h內約有6.5％代謝物從膽汁排出，說明125I-FNNHBDPP代謝物主要通過腎臟排泄。125I-FNNHBDPP在小鼠各組織中隨時間的動態(tài)分布狀況，5min時放射活性在各臟器的