大鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中Ubiquitin的表達及其法醫(yī)學意義.pdf

1、目的：泛素(Ubiquitin)是熱休克蛋白家族中分子量最小的一員，在真核生物中廣泛存在，其分布非常豐富，從生殖細胞到各種體細胞都廣泛存在。它由76個氨基酸組成，分子量約8．5KD，其氨基酸序列高度保守。在應激因素作用下，細胞內形成各種異常蛋白質，對細胞造成嚴重損傷，此時，Ubiquitin將會與之共價結合，再通過蛋白酶體將其降解，以恢復細胞的正常功能。這種蛋白質與Ubiquitin結合的現(xiàn)象稱為蛋白質泛素化，細胞內蛋白質泛素化參與了細

2、胞的多種生理過程。近年來的研究表明，在刺激、損傷等多種因素的作用下，Ubiquitin可被誘導產(chǎn)生，它與阿茨海默氏病、腫瘤等多種疾病或損傷有密切關系。目前，Ubiquitin在法醫(yī)學領域的研究在世界范圍內都顯得比較匱乏，尤其是對Ubiquitin與皮膚損傷以及由此產(chǎn)生的損傷時間推斷問題的研究更是幾乎一片空白。本實驗建立大鼠皮膚切創(chuàng)模型，對ubiquitin在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中的表達情況和表達規(guī)律進行研究，探討其在皮膚損傷中的作用及機制，

3、為解決損傷時間推斷這一法醫(yī)學難題提供新的方向和實驗室依據(jù)。 方法：采用完全隨機分組方法，根據(jù)造創(chuàng)后處死時間不同將實驗大鼠隨機分為傷后m、3h、6h、12h、ld、3d、6d、10d、14d組，另設一組為正常對照組，即未造創(chuàng)組。在預定時間分別處死大鼠，取創(chuàng)口邊緣處皮膚全層組織(對照組取與實驗組相同部位之皮膚組織)，進行HE染色和Ubiquitin免疫組化SP法染色，并對染色結果進行光鏡觀察、圖像分析及統(tǒng)計學處理，以了解Ubiqui

4、tin在皮膚切創(chuàng)愈合過程中的表達情況和表達規(guī)律。 結果：1、創(chuàng)口愈合過程肉眼觀察：傷后1d內，創(chuàng)口處痂皮形成；傷后3d內，創(chuàng)緣皮膚紅腫消退；傷后6d內，痂皮剝脫，肉芽組織形成；傷后10～14d，創(chuàng)口完全愈合。2、HE染色觀察：傷后1d內，大量炎性細胞浸潤，早期以中性粒細胞浸潤為主，后期以單核一巨噬細胞浸潤為主；傷后3～6d，肉芽組織逐漸形成并大量增生；傷后lO～14d，肉芽組織逐漸成熟，炎性細胞消失，創(chuàng)口修復。正常對照組無上述改

5、變。3、免疫組化SP法染色觀察：傷后1d內，Ubiquitin在毛細血管內皮細胞和大量浸潤的炎性細胞中染色呈陽性，傷后12h以前以中性粒細胞陽性染色為主，傷后12h以后以單核一巨噬細胞陽性染色為主；傷后3～6d，Ubiquitin在逐漸形成并大量增生的肉芽組織中呈陽性染色；傷后10～14d，Ubiquitin在逐漸成熟的肉芽組織中仍有陽性染色，后期以膠原纖維染色為主，但染色范圍和強度明顯減弱。正常對照組在表皮層、毛囊和皮脂腺等有弱陽性染

6、色，但強度較實驗組弱且無上述實驗組的染色改變。4、圖像分析結果：IOD值在傷后1h到傷后6d逐漸上升，傷后6d達到高峰，傷后10～14d，IOD值逐漸下降。5、統(tǒng)計學處理結果：方差分析結果表明各組之間差異有顯著性意義(P<0．05)。組間兩兩比較表明，傷后6d組與其余各組差異有顯著性意義(P<0．05)，傷后14d組與正常對照組差異無顯著性意義(P＞O．05)。 結論：1、大鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中Ubiquitin表達量的變化具有

7、規(guī)律性，呈現(xiàn)出表達升高期．表達高峰期．表達下降期這一有序性變化曲線，其中創(chuàng)傷后3～6d是其表達的高峰期，傷后第6d是其表達的頂峰。2、大鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中Ubiquitin表達陽性的細胞或組織的變化具有規(guī)律性，呈現(xiàn)出早期以中性粒細胞表達為主，高峰期以單核．巨噬細胞、毛細血管內皮細胞、成纖維細胞表達為主，后期以成熟肉芽組織成分及膠原纖維表達為主的動態(tài)變化趨勢。3、Ubiquitin在皮膚損傷中的表達變化規(guī)律可以為解決損傷時間推斷難題提供