免疫金標(biāo)記技術(shù)快速檢測轉(zhuǎn)Bt基因棉抗性的研究.pdf

1、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文免疫金標(biāo)記技術(shù)快速檢測轉(zhuǎn)Bt基因棉抗性的研究姓名：王清申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師：吳振廷20050601試紙條具體操作步驟如下：( 1 ) 取出試紙條恢復(fù)至室溫。( 2 ) 將有膠體金復(fù)合物端插入檢測樣品。( 3 ) 1 0 一2 0 m i n 判斷結(jié)果。( 4 ) 結(jié)果判斷a ．試紙條僅質(zhì)控點(diǎn)( 加羊抗兔抗體) 出現(xiàn)一紫紅色點(diǎn)者判為正常( 陰性結(jié)果) 。b ．試紙條上出現(xiàn)兩個(gè)紫紅色點(diǎn)者

2、為陽性結(jié)果。C ．試紙條兩端都沒有紫紅色點(diǎn)出現(xiàn)者則為無效結(jié)果。說明此試紙條已經(jīng)失效。試紙條靈敏度測試試驗(yàn)結(jié)果表明，試紙條檢測極限為l O n g ／m l 。試紙條4 ℃干燥保存一個(gè)月后再進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果穩(wěn)定。4 ．檢測8 t 毒蛋白免疫斑點(diǎn)金染色法模型的建立本文建立了用免疫斑點(diǎn)金染色法檢測B t 毒蛋白的檢測模型，其具體方法為在M i l I p o r e 孔徑為0 ．4 5 um 硝酸纖維素膜( N C ) ，畫出O ．8 c m

3、見方的格子，在格子中央點(diǎn)待測樣品l ul ，自然晾干。用0 ．O I Mp H 7 ．2 的P B S 洗滌后，將硝酸纖維素膜( N C膜) 置于封閉液中，室溫孵育3 0 m i n 后，分別用蒸餾水和0 ．O I M p H 7 ．2 的P B S 洗滌數(shù)次。再將硝酸纖維素膜浸泡于稀釋4 倍的金標(biāo)抗體溶液中，置于室溫孵育3 0 m i n ，觀察結(jié)果：出現(xiàn)紫紅色為斑點(diǎn)陽性結(jié)果，無紫紅色斑點(diǎn)則為陰性結(jié)果。其檢測極限為1 6 n g ／m