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1、Y938S01分類號(hào):密級(jí):?jiǎn)挝淮a:10019Y938801Y938820學(xué)號(hào):S030024弋蛾寰t夭魯碩士學(xué)位論文用合成多肽制備BtCrylA抗體的研究StudiesontheDevelopmentofAntibodiesAgainstBtCrylAProteinUsingSyntheticPeptides指導(dǎo)教師:王堡民副塑握申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別:盔堂亟專業(yè)名稱:佳物栽量與越往堂研究方向:兔疫技壅在擅塑盟窺:匕的廑眉所在學(xué)院:盔堂皇
2、生物墊苤堂院2006年6月AbstractELISAisaconvenient,rapidmethodandcanaccuratelydetectBtinsectidalcrystalproteinItwaswidelyusedinthestudyofthecontentofinsecticidalcrystalproteinintransgenicBtcotton,theexpressionofBtgeneandthedynamicr
3、esistancetopestTheprecisionandcredibilityoftheELlSAmethoddependsonthespecificityofBtcrylAantibobiesInthisresearchantibodieswerederivedfromsytheticpeptidesinordertosolvethespecificityofantibodiesBybioinformaticstechniquet
4、opredictandanalyzetheepitopesofBtCrylAinsecticidalcrystalprotein,twopeptideswhichcontain16aminoacidresiduesrespectivelywithhighhydrophilicityandgoodantigenicitywereselectedandsubsequentlysynthsizedbysolid—phasesynthesism
5、ethodThesyntheticpeptideswerepurifiedbyHPLCandtheirmolecularmasseswereconfirmedbymassspectrumThesyntheticpeptides,whichwereconjugatedtoBSAbyglutaraldehyde,wereusedasimmunogenstogeneratepolyclonalantibodiesinNewZealandwhi
6、terabbitsTheantibodieswereappliedtoanELISAforthedetectionofinsecticidalcrystalproteinintransgenicBtcottonResultsshowedthatthesyntheticpeptidesgaverisetoahightiterpolyclonalantibodywhichwasabletecognizetheBtinsecticidalcr
7、ystalproteinAntibodydilutionwasI:50000andtheminimaldetectableconcentrationofpurifiedBtproteinwas497ng/mLAnELISAwasdevelopedfordetectionofinsecticidalcrystalproteinbasedontheaboveantibodyThetransgenicBtcottonvarietiescanb
8、edifferentiatedfromnonBtcottonvarietiesusingtheELISAandthecontentofBtinsecticidalcrystalproteincanbequantitatedComparedwiththedatasdeterminedbyEnvirologixCrylAb/CrylAcQuantiPlateKits,therewasagoodcorrelationItwasindicate
9、dthattheELISAmethodinthisresearchwasreliableThesyntheticpeptideantigenwhichcansubstitutethewholenativeBtproteinantigenprovidesanewwayforthepreparationofBtantibodiesandthedetectionofBtinsecticidalcrystalproteinKeyWord:BtC
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