二倍體馬鈴薯青枯病抗性的分離及分子標(biāo)記鑒定.pdf

1、該試驗(yàn)旨在利用具有青枯病抗性的原始栽培種S.phureja及野生種S.vernei所產(chǎn)生的二個(gè)相關(guān)的二倍體分離群體(CE,BC1)和(ED,F1),進(jìn)行田間溫室青枯菌接種鑒定,分析二倍體馬鈴薯青枯病抗性的遺傳規(guī)律;并利用RAPD技術(shù),結(jié)合群分法(Bulked Segregant Analysis, BSA)策略,篩選與青枯病抗性緊密連鎖的分子標(biāo)記.主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.通過青枯菌生理1號(hào)小種(生化小種3號(hào))對(duì)兩群體單株進(jìn)行田間溫室接種鑒

2、定,發(fā)現(xiàn)CE、ED兩群體青枯病抗性的分離比例,經(jīng)卡方測驗(yàn)均符合1:1,為分析標(biāo)記的共分離奠定了基礎(chǔ).2.利用RAPD技術(shù),結(jié)合群分法,從160個(gè)隨機(jī)引物中篩選得到兩個(gè)與青枯病抗性連鎖的標(biāo)記OPA07<,446>和OPA12<,980>,對(duì)于ED群體,標(biāo)記OPA07<,446>與青枯病抗性位點(diǎn)的圖譜距離為14.7cM,OPA12<,980>與青枯病抗性位點(diǎn)的圖譜距離為24.7cM,并且位于同一連鎖群,為一對(duì)側(cè)翼標(biāo)記,兩個(gè)標(biāo)記之間連鎖距離為

3、39.4cM.對(duì)于CE群體,標(biāo)記OPA07<,446>與青枯病抗性位點(diǎn)的圖譜距離為23.9cM,OPA12<,980>與青枯病抗性位點(diǎn)的圖譜距離為31.4cM,但在CE群體中,沒有檢測到兩標(biāo)記間存在連鎖.3.對(duì)單標(biāo)記與雙標(biāo)記選擇準(zhǔn)確性的比較發(fā)現(xiàn),在ED群體中,標(biāo)記OPA07<,446>選擇的準(zhǔn)確率為85.7﹪,標(biāo)記OPA12<,980>選擇的準(zhǔn)確率為75.7﹪,兩個(gè)標(biāo)記OPA07<,446>和OPA12<,980>一起選擇的準(zhǔn)確率為95

4、.7﹪;在CE群體中,標(biāo)記OPA07<,446>選擇的準(zhǔn)確率為77.8﹪,標(biāo)記OPA12<,980>選擇的準(zhǔn)確率為72.2﹪,兩個(gè)標(biāo)記OPA07<,446>和OPA12<,980>一起選擇的準(zhǔn)確率為95.0﹪.據(jù)此提出了雙側(cè)翼標(biāo)記共選擇的分子標(biāo)記輔助選擇策略.4.通過對(duì)特異標(biāo)記片段的回收、克隆及測序,設(shè)計(jì)SCAR引物,成功將RAPD標(biāo)記OPA07<,446>和OPA12<,980>轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記SCA07<,446>和SCA12<,