外殼蛋白羧端序列缺失對煙草花葉病毒侵染性的影響.pdf

1、煙草花葉病毒是煙草花葉病毒屬的典型成員，為單組分正義單鏈RNA病毒，基因組全長6395，病毒RNA由外殼蛋白包裝成長約300nm，直徑約18nm的桿狀病毒粒子。TMV系統(tǒng)感染煙草后，CP表達量可達到被感染煙草總蛋白的7％。煙草花葉病毒的CP亞基由4個α螺旋組成，蛋白的N端和C端暴露在外部，并且研究表明羧端4個氨基酸對于穩(wěn)定整個蛋白三維結構的作用不明顯，在利用病毒載體表達外源多肽的時候，本實驗室發(fā)現了TMV-U1株系的羧端若干氨基酸的缺失

2、并不影響融合外源肽的外殼蛋白的高效表達，并曾經在CP羧端152位后插入外源肽并缺失野生型CP羧端相應的六個氨基酸序列(T153-T158)的重組病毒仍然能高效表達。 本文主要對野生型煙草花葉病毒(TMV-U1)的外殼蛋白羧端序列進行系列缺失突變，研究羧端若干氨基酸的缺失對于病毒侵染性的影響，以此來確定外殼蛋白羧端氨基酸的保守性，并且為利用煙草病毒載體表達外源肽提供一定的參考價值。 在對外殼蛋白羧端氨基酸的缺失研究中，觀察

3、到TMV-U1株系的外殼蛋白羧端序列缺失六個氨基酸(保留152個氨基酸)仍能較強系統(tǒng)侵染煙草并高水平表達外殼蛋白，且能在新生葉里復制大量完整的病毒粒子，但相對于野生型，其侵染性已經顯現弱化趨勢，而缺失七個氨基酸(保留151個氨基酸)，則病毒的長距離運輸能力弱化，在新生葉中只能檢測到病毒基因組，但不能檢測到外殼蛋白和完整病毒粒子。 外殼蛋白羧端缺失四個和五個氨基酸的突變病毒均能正常系統(tǒng)感染煙草，高效表達外殼蛋白，侵染性與野生型相當