外源基因在擬南芥轉(zhuǎn)基因植株中的遺傳研究.pdf

1、以通過(guò)植物原位真空滲入遺傳轉(zhuǎn)化所獲得的轉(zhuǎn)基因擬南芥(攜帶目的基因CaMV基因Ⅵ和標(biāo)記基因hpt)為試驗(yàn)材料,通過(guò)自交和雜交,以潮霉素抗性為表型標(biāo)記性狀,采用遺傳學(xué)分析和PCR檢測(cè)相結(jié)合的方法,研究了外源基因的遺傳穩(wěn)定性及遺傳傳遞規(guī)律,包括自交后代的外源基因中分離情況,外源基因?qū)ε渥拥挠绊懞屯庠椿虻恼衔稽c(diǎn)分析等.獲得以下主要結(jié)果:1.29個(gè)T<,1>代植株的自交后代(T<,2>代)對(duì)潮霉素的抗性分離比例復(fù)雜,只有8個(gè)植株的后代符合孟德

2、爾單顯性基因遺傳模式,大多數(shù)偏離3:1的比例,抗性植株比率偏低,說(shuō)明外源基因以單位點(diǎn)插入,T<,1>代轉(zhuǎn)基因植株在自交繁殖過(guò)程中存在轉(zhuǎn)基因的沉默或丟失現(xiàn)象.轉(zhuǎn)基因株系在T<,3>代的遺傳已比較穩(wěn)定,符合孟德?tīng)栠z傳,抗性分離比例表現(xiàn)為3:1或1:0.隨著自交世代的增加,外源基因的遺傳性趨于穩(wěn)定.2.將得到的4個(gè)純合株系分別與其野生型雜交,正反交結(jié)果均為F<,1>代全顯性,F<,2>代潮霉素抗感比例為3:1,驗(yàn)證了外源基因的單位點(diǎn)插入,潮霉

3、素抗性性狀由—對(duì)顯性基因控制,轉(zhuǎn)基因在雌雄配子中的傳遞無(wú)差異,不受細(xì)胞質(zhì)的影響.3.來(lái)自不同T<,1>代的4個(gè)轉(zhuǎn)基因純合株系配組雜交,6個(gè)雜交組合中除P2×P4外,其余5個(gè)組合的F<,2>代潮霉素抗性分離比為15:1,說(shuō)明各組合中外源基因插入到非同源染色體上;P2×P4組合的抗性株率為99.43%,說(shuō)明外源基因在P2和P4中可能插入到同源染色體的不同位點(diǎn)上.4.對(duì)隨機(jī)選取的潮霉素抗性植株不同世代和雜交后代49株進(jìn)行PCR檢測(cè),48株都獲