12421.產β甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌的改造及發(fā)酵條件優(yōu)化

1、中圖分類號Q墨!墨UDC663碩士學位論文學校代碼密級10533公開產p一甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌的改造及發(fā)酵條件優(yōu)化ReconstructionandOptimizationofFermentationConditionsofRecombinantPichiapastorisProducing13mannanase作者姓名：學科專業(yè)：研究方向：學院(系、所)：指導教師：王冶生物學生物工程資源加工與生物工程學院周洪波教授答辯委員會主席中

2、南大學2014年5月碩士學位論文摘要產p甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌的改造及發(fā)酵條件優(yōu)化摘要：p1，4一D一甘露聚糖ig疊s(endo1，4Dmannanase，EC32178)是一種廣泛應用于飼料和食品等行業(yè)中的半纖維素水解酶，具有重要經濟價值。本研究將組成型產D甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌中的儀factor信號肽替換成五種新信號肽(W1、MF4I、INUlA、apre、HFBI)。對比伐factor信號肽，Wl、MF4I、ctpre、HFB

3、I信號肽改造菌株的相對酶活分別達到235％、2035％、797％和1203％，INUlA無胞外D甘露聚糖酶活性。通過RTPCR對p甘露聚糖酶基因拷貝數(shù)進行測定的結果表明0【factor和MF4I兩種重組子的MAN活力均于4個拷貝數(shù)時達到最大。替換MF4I信號肽的重組子在16個MAN基因拷貝數(shù)的水平上對比u—factor信號肽的重組子，提高的MAN活力分別達到6630U／m1、9056U／ml、13337U／ml、17397U／ml、10

4、292U／ml、10226U／fml，相對酶活分別達到5120％、2090％、1053％、1002％、997％、1052％。4個拷貝數(shù)的MF4I重組子MAN活力相對最大，可以達到3475刪。選用SⅧ1168作為表達宿主的重組子的平均酶活只能達到X33宿主型的627％641％。而將pPICZaMAN質粒中的Qfactor進行MF4I信號肽改造，重新構建得到的誘導型pAOXlMF4I一此刪基因工程菌的酶活可以達到原來組成型pGAPZMF41

5、A刪Ⅳ基因工程菌中酶活最高水平的23倍，將其用于下一步高密度發(fā)酵。經單因素實驗摸索發(fā)酵基礎培養(yǎng)基氮源和碳源分別為279／L的玉米漿干粉和20g／L的食品級葡萄糖，并在誘導流加培養(yǎng)基中新添加2g／L硫酸銨和O5g／L油酸。綜合信號肽和啟動子改造優(yōu)化后的產B甘露聚糖酶畢赤酵母工程菌經5L發(fā)酵罐高密度發(fā)酵后，產出的D。甘露聚糖酶最高活力從搖瓶的17335U／ml提高至6890U／ml，總體提高幅度達到397倍。關鍵詞：p甘露聚糖酶；畢赤酵母；