15676.兩種兩棲動(dòng)物皮膚中促皮膚修復(fù)肽的結(jié)構(gòu)和功能分析

1、ByHanLiuADissertationSubmittedtoUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofDoctorofScienceUniversityofChineseAcademyofSciences&KunmingInstituteofZoologyChineseAcademyofSciencesK

2、unming，Yunnan，PRChinaNovember2013中英文摘要摘要舳IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIlilIY2608008皮膚作為生物體抵御外界環(huán)境侵害的第一道防線，對(duì)生物的正常生存起著至關(guān)重要的作用，但同時(shí)皮膚也成為最容易受到損傷的器官，因此當(dāng)受到外界損傷時(shí)機(jī)體對(duì)皮膚的自我修復(fù)過程就變得尤為重要。雖然說(shuō)皮膚損傷修復(fù)的過程是一個(gè)極其自然而普遍的過程，正常情況下當(dāng)生物體皮膚受到損傷時(shí)，均會(huì)啟動(dòng)一系列應(yīng)對(duì)和

3、級(jí)聯(lián)反應(yīng)以促進(jìn)傷口愈合和皮膚的快速修復(fù)，但是也有很多因素會(huì)影響傷口愈合過程中的某一個(gè)或某幾個(gè)階段，從而造成組織修復(fù)障礙甚至久傷不愈。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在美國(guó)，難愈性皮膚修復(fù)障礙影響了300到600萬(wàn)人，其中65歲以上的老年人占了85％。難愈性皮膚修復(fù)障礙每年帶來(lái)的巨額醫(yī)療花費(fèi)總計(jì)超過30億美元。開發(fā)出更有效地促傷口愈合的藥物成為亟待解決的問題。兩棲類皮膚作為一個(gè)多功能器官，對(duì)于其生存發(fā)揮著重要作用。它直接暴露在一些生物和非生物損傷下，如微生物感染

4、、寄生蟲、捕食者以及物理性傷害如輻射和機(jī)械損傷等。兩棲類皮膚作為一個(gè)巨大的資源庫(kù)，里面包括了多種有藥用活性的多肽分子，如抗菌肽、抗氧化肽、緩激肽、神經(jīng)毒素等。雖然兩棲類皮膚裸露、脆弱易受到傷害，但對(duì)于其皮膚傷口愈合的能力卻知之甚少。之前已有文獻(xiàn)報(bào)道用兩棲類皮膚粗樣涂抹在小鼠創(chuàng)面上對(duì)創(chuàng)面愈合有良好的促進(jìn)作用，但卻從未從兩棲動(dòng)物中鑒定出具體發(fā)揮促愈合作用的多肽。在對(duì)華南雨蛙的皮膚活性多肽的研究中，我們通過分離純化的手段從其皮膚分泌液中分離得

5、到6條同源性很高的小肽序列，分別命名為hylareleasinl一3和9—11。經(jīng)過一系列活性檢測(cè)后我們發(fā)現(xiàn)這幾條小肽中的hylareleasin3有明顯促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Humanumbilicalveinendothelialcells，HUVEC)細(xì)胞增殖的活性。而后，我們通過對(duì)這幾條小肽設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，從華南雨蛙皮膚eDNA文庫(kù)中篩選得到這幾條小肽的cDNA全序列，同時(shí)還得到另外5條同源性很高的cDNA序列，我們將其命名為pr